Следећа анализа могућих проблема уБуццалбрис/ФТА card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Колона за пречишћавање је зачепљена

У овом комплету, у операцији екстракције геномске ДНК, колона за пречишћавање се директно адсорбује на смешу ензимске лизе узорка без корака центрифугирања, а колона за пречишћавање може бити блокирана због непотпуне ензимизације и високог вискозитета узорка.

Следећи могући узроци су следећи:

1. Непотпуна ензимска дигестија узорака ткива.

Препорука: Време обраде узорка Форегене Протеасе може се на одговарајући начин продужити или се супернатант може узети након центрифугирања на 12.000 рпм (~13.400× г) 5 мин.

2. Прекомерна употреба узорака ткива или великих ткива.

Препорука: Најбоље је да не прелазите 1Буццал брис у узорку;ако је узорак превелик, повећајте дозу пуфера СТ1, фореген протеазе, пуфера СТ2 у складу са тим.

3. Вискозитет узорка је превисок.

Препорука: Узорци се могу на одговарајући начин разблажити са 10 мМ Трис-ХЦл пре екстракције геномске ДНК.

4. Фрагменти крвног картона су усисани.

Препорука: Време пролазног центрифугирања корака 6 геномске екстракције крвних тачака (ФТА картица) може се на одговарајући начин продужити.

Низак принос или без ДНК

Често постоји низ фактора који утичу на принос геномске ДНК, укључујући порекло узорка, услове складиштења узорка, припрему узорка, манипулацију итд.

Геномска ДНК се не може добити током екстракције

Могући узроци су следећи:

1. Неправилно чување узорака или предуго складиштење доводи до деградације геномске ДНК.

Препорука: Оралне брисеве пожељно је узимати свеже, а није препоручљиво користити сачуване брисеве за операције екстракције геномске ДНК;узорци крвних мрља треба да обезбеде да је квалитет квалификован и да време складиштења не би требало да буде предуго.

2. Премала употреба ткива може довести до изостанка екстракције одговарајуће геномске ДНК.

Препорука: Пратитебуццал упутства за узимање узорака бриса у упутству за рад и обришите што је више пута могуће тако да се довољно ћелија може причврстити на орални брис за екстракцију геномске ДНК;за вађење узорка крвне мрље, површина сечења крвне мрље може се на одговарајући начин повећати.

3. Фореген протеаза је непрописно очувана, што доводи до смањења њене активности или инактивације.

Препорука: Потврдите услове складиштењатхе Фореген протеазе или је замените новом фореген протеазом за ензимску реакцију.

4. Неправилно очување комплета или време складиштења је предуго, што доводи до квара неких компоненти у комплету.

Препорука: Купите новуБуццал брис ДНКизолација комплет за сродне процедуре.

5. Пуфер ВБ не додаје апсолутни етанол.

Препорука: Потврдите да пуфер ВБ додаје тачну запремину апсолутног етанола.

6. Елуент није правилно додат силиконском филму.

Препорука: Додајте 65°Цпретходно загрејан елуент капне до средине силиконске мембране и остави на собној температури 5 мин да би се повећала ефикасност елуирања.

Lов-принос геномске ДНК изолован

Следећи могући узроци су следећи:

1. Неправилно чување узорака или предуго складиштење доводи до деградације геномске ДНК.

Препорука: Орални брисеви се по могућству узимају свеже, а сачувани брисеви не би требало да се користе за екстракцију геномске ДНК.

2. Ако је количина узорка ткива премала, садржај екстраховане геномске ДНК ће бити мањи.

Препорука: Пратите упутства за узимање узорака оралног бриса у упутству за употребу, обришите што је више пута могуће како би се довољно ћелија могло причврстити на орални брис за екстракцију геномске ДНК.

3. Фореген протеаза је непрописно очувана, што доводи до смањења њене активности или инактивације.

Препорука: Потврдите услове складиштењаthe Fореген Протеасе или је замените новом Фореген протеаза за ензимску реакцију.

4. Проблеми са елуентом.

Препорука: Користите пуфер ЕБ за елуирање;ако користите ддХ₂О или други елуенти, потврдите да је пХ елуата између 7,0-8,5.

5. Елуат није правилно додан кап по кап.

Препорука: Додајте капи елуента у средину силиконске мембране и оставите на собној температури 5 минута да повећате ефикасност елуирања.

6. Течност за елуирање се акумулира премало.

Препорука: Користите елуент за елуирање геномске ДНК како се захтева у упутствима, најмањеништа мање од 15μl.

Lов чистоћа of геномска ДНКизолован

Ниска чистоћа геномске ДНК може довести до неуспеха или незадовољавајућих резултата низводних експеримената, као што су: ензими се не могу отворити, ПЦР не може добити фрагмент гена од интереса, итд.

Могући узроци су следећи:

1. Хетеропротеинско загађење, РНК загађење.

Анализа: Колона за пречишћавање није испрана пуфером ПВ;колона за пречишћавање пуфера ПВ није испрана правилном центрифугалном брзином.

Препорука: Уверите се да нема талога у супернатанту пре додавања етанола;обавезно оперите колону за пречишћавање у складу са упутствима, а овај корак се не може изоставити.

2. Загађење јонима нечистоћа.

Анализа: Колона за пречишћавање пуфера ВБ је изостављена или је испрана само једном, што је резултирало заосталом јонском контаминацијом.

Препорука: Обавезно исперите пуфер ВБ 2 пута према упутствима да бисте уклонили заостале јоне што је више могуће.

3. Контаминација РНК ензима.

Анализа: Стране РНазе су додате пуферу;Операција испирања пуфера ПВ је била нетачна, што је резултирало остацима РНасе, што је утицало на низводне експерименталне операције РНК, као што је ин витро транскрипција.

Препорука: Нуклеинска киселина Форегене серијеисолакомплети могу уклонити РНК без додатног додавања РНКазе,тако букални брис/ФТА картица ДНК изолациони комплетнеедн't адд РНасе;обавезно пратите упутства за колону за пречишћавање пуфера ПВ и овај корак се не може изоставити.

4. Остатак етанола.

Анализа: Пуфер ВБ није извршио центрифугирање празне епрувете након прања колоне за пречишћавање.

Препорука: Извршите исправну операцију центрифугирања празне епрувете према упутствима.

5. Загађење другим нечистоћама.

Анализа: Сачувани узорци или специјални узорци нису претходно третирани.

Препорука: Темељно претходно обрадите узорак према упутствима.