Аутори: Ванг Ксиаоиан, Зхао Ериу

Јединица: болница Јиаозхоу, болница Донгфанг повезана са Универзитетом Тонгји

Тренутно, главни тип узорка за детекцију нуклеинске киселине респираторног патогена је брис грла.Постоји много врста уобичајено коришћених решења за очување узорака, од којих сви морају да буду у фрижидеру или замрзнути за транспорт и складиштење;Тешко је контролисати цео процес ниске температуре током процеса сакупљања и транспорта, а тешко је обезбедити контролу квалитета пре испитивања узорка^[1-2].

РНКаза (РНасе) је ендонуклеаза која хидролизује РНК, углавном прекидајући фосфодиестарске везе између нуклеотида.Молекул РНазе је веома стабилан, у структури постоје дисулфидне везе, а за његову активност није потребно присуство двовалентних катјона, па се РНаза не денатурише лако, а лако се ренатурише чак и након високе температуре или употребе денатуранса.РНазе се деле на ендогене и егзогене.Ендогене РНазе се могу ослободити у исто време када су ћелије руптуре.Стога је елиминисање улоге ендогених РНаза веома критичан корак у процесу екстракције РНК.Егзогене РНазе су широко распрострањене.РНазе постоје у ваздуху, људској кожи, коси и пљувачки, што су важни разлози за лаку деградацију РНК^[3].

Упит за податке

ЦАНС-ЦЛ02-А009 „Примена Смерница за квалитет и акредитацију медицинских лабораторија у области молекуларне дијагнозе“ у техничким захтевима предлаже да се одговарајући стандарди квалитета воде формулишу у складу са апликацијом;Непропусни контејнери за једнократну употребу:

РНасе/Класификација

(1) РНаза А

Рибонуклеаза А (РНаза А), изведена из говеђег панкреаса, је ендорибонуклеаза која може специфично да нападне 3′ крај остатака пиримидина на РНК, пресецајући цитозин или урацил формиран од суседних нуклеотида.Фосфодиестарска веза, крајњи производ реакције је 3′ пиримидин нуклеотид и олигонуклеотид са 3′ пиримидин нуклеотидом на крају.

(2) РНКаза Т1

Рибонуклеаза Т1 (РНасе Т1) је изведена из Аспергиллус орјзае, специфично делује на 3′-терминални фосфат гванина, а место цепања је између 3′ фосфата гванина и 5′ хидроксила суседног нуклеоти.Коначни производ реакције је 3′гванилна киселина и фрагменти олигонуклеотида са 3′гванилном киселином на крају.

(3) РНаза Х

Рибонуклеаза Х (РНасе Х) је први пут откривена из ткива тимуса телета, а њен кодирајући ген је клониран у Есцхерицхиа цоли.Може специфично да разгради ДНК: РНК ланци у РНК хибридним дуплексима, што резултира олигонуклеотидима и мононуклеотидима са 3′-ОХ и 5′-монофосфатним крајевима, не може деградирати једноланчану или дволанчану ДНК или РНК.

РНасе

Функција и употреба

Рибонуклеаза може катализовати разградњу рибонуклеинске киселине (РНК) и може се вештачки синтетизовати.Лековита маст се користи локално за лечење трауме и болова у зглобовима.Према извештајима, рибонуклеаза може да промени метаболизам ћелије домаћина, инхибира синтезу вируса, инхибира пролиферацију вируса грипа ин витро и инхибира стварање вакциније и вируса херпеса у пилећим ембрионима.Клиничка употреба рибонуклеазе дневне интрамускуларне ињекције од 180 мг, корисна за лечење епидемијског енцефалитиса, рибонуклеаза може катализирати разградњу рибонуклеинске киселине (РНА) и сада се може вештачки синтетизовати.Лековита маст се користи локално за лечење трауме и болова у зглобовима.Према извештајима, рибонуклеаза може да промени метаболизам ћелије домаћина, инхибира синтезу вируса, инхибира пролиферацију вируса грипа ин витро и инхибира стварање вакциније и вируса херпеса у пилећим ембрионима.Клиничка употреба рибонуклеазе дневне интрамускуларне ињекције од 180 мг је корисна за лечење епидемијског енцефалитиса.

РНасе

Дефиниција инхибитора

Дефиниција јединице инхибитора РНазе: Количина ензима потребна за инхибицију 50% активности 5нг РНазе А је једна јединица.

Како раде инхибитори РНасе

Гванидин изотиоцијанат:

Гванидин изотиоцијанат је органско једињење са молекулском формулом Ц2Х6Н4С.Углавном се користи у биолошкој медицини, хемијским реагенсима итд. Гванидин изотиоцијанат је агенс за лизу протеина, а често се користи као главна компонента раствора за лизу у молекуларним дијагностичким реагенсима.Може да лизира ткиво, уништи ћелијску структуру и дисоцира нуклеинску киселину од нуклеопротеина и има снажну денатурацију у РНазу.То је тренутно најефикаснији инхибитор РНазе.

ТРИзол је нови реагенс за екстракцију укупне РНК који може директно да екстрахује укупну РНК из ћелија или ткива.Садржи супстанце као што су фенол и гванидин изотиоцијанат, који могу брзо да поремете ћелије и инхибирају нуклеазе које ћелије ослобађају.

(Међутим, гванидин изотиоцијанат је опасан по здравље лабораторијских истраживача.)

РНасин:

Кисели гликопротеин екстрахован из јетре пацова или људског бластодерма.Рназин је неконкурентни инхибитор РНазе, који се може везати за различите РНазе да би их инактивирао.

(Више детаља: хттпс://ввв.фореивд.цом/фореаси-рнасе-инхибитор-продуцт/)

Hвисока температура:

Висока температура је такође уобичајено средство за денатурацију протеина.

Диетилпирокарбонат (ДЕПЦ):

ДЕПЦ је јак, али некомплетан инхибитор РНазе, који може инхибирати активност РНазе комбиновањем са имидазолним прстеном аминокиселине активне групе РНазе ради денатурације протеина.

Ванадил рибонуклеозид комплекс:

Комплекс формиран од јона ванадијум оксида и нуклеозида, који се везује за РНазу у облику прелазних супстанци, које могу скоро у потпуности да инхибирају активност РНазе

остало:

СДС, уреа, дијатомејска земља итд. такође имају одређени инхибиторни ефекат на РНазу.

Екперт Ревиевс

Ли Иујие главни техничар

Директор лабораторијског одељења, болница Јиаозхоу, болница Донгфанг повезана са Универзитетом Тонгји

Да би се спречила биоразградња егзогене РНКазе, маске, рукавице и шешири треба да се носе и често мењају током процеса екстракције РНК.Сва стаклена посуда се мора пећи у рерни за сушење на 200°Ц дуже од 2 сата.Материјале који се користе за печење, као што је пластика, треба третирати ДЕПЦ водом, а затим опрати дестилованом водом.Реагенси или уређаји који се користе за екстракцију, очување и идентификацију РНК треба да буду посвећени РНК и да се успостави независна област за рад РНК.

референце:

[1] Смитх-Ваугхан ХЦ, Бинкс МЈ, Беиссбартх Ј, ет ал.Бактерије и вируси у назофаринксу непосредно пре појаве акутних инфекција доњих респираторних органа код деце староседелаца Аустралије [Ј].Еур Ј Цлин Мицробиол Инфецт Дис, 2018, 37 (9): 1785-1794.

[2] Огранак за контролу болничких инфекција Кинеског удружења за превентивну медицину.Смернице за сакупљање и инспекцију клиничких микробних узорака [Ј].Кинески часопис о болничкој инфекцији, 2018 (20): 3192-3200.

[3] „Клинички тест Десет хиљада зашто тест молекуларне биологије“