Успоставити СОП за ПЦР експеримент да стандардизује понашање особља за експеримент.
Експериментатор се стриктно придржава оперативних процедура и минимизира ПЦР загађење које може бити узроковано људским фактором или спречава појаву загађења.Поред тога, експериментатор треба да поседује одговарајућа професионална знања и вештине, укључујући вештину у руковању пратећом опремом, појашњавању целокупног процеса рада, овладавању методама третмана контаминације и методама лабораторијске контроле квалитета, као и способношћу да правилно интерпретира резултате испитивања.
Успоставити стандардну ПЦР лабораторију.
ПЦР лабораторија је у принципу подељена на четири области, односно област за припрему реагенса, област за обраду узорака, област амплификације и област анализе производа амплификације.Прве две области су области пре појачања, а последње две области су области после појачања.Зона пре појачања и зона после појачања треба да буду строго одвојене.Експериментални материјали, реагенси, папир за снимање, оловке, материјали за чишћење, итд., могу да теку само из области пре амплификације у област после амплификације, односно из области припреме реагенса → области обраде узорка → области амплификације → области анализе производа амплификације, и не смеју да тече уназад.Проток ваздуха у лабораторији такође треба да тече из области пре појачања у област после појачања, а не да тече уназад.Идеалан дизајн ПЦР лабораторије је приказан у наставку:
Слика А: Идеалан режим подешавања ПЦР лабораторије са негативним притиском у тампон просторији
Слика Б: Идеалан режим подешавања ПЦР лабораторије са позитивним притиском у просторији за тампон
Дијаграми подешавања ПЦР лабораторије дати на слици А и слици Б би требало да буду идеалнији режим подешавања, а лабораторија са условима може да се позове на овај режим за пројектовање.За обичне лабораторије, препоручује се да се област ПЦР амплификације и област анализе производа могу раздвојити, а отварање поклопца треба што је више могуће смањити у области припреме узорка и области ПЦР амплификације.Запамтите: Строго је забрањено одношење производа и експерименталног материјала из области анализе производа у област за припрему узорка и област ПЦР амплификације.
Ако лабораторија обавља само ПЦР детекцију и идентификацију, препоручује се употреба флуоресцентне квантитативне ПЦР уместо конвенционалне ПЦР.
Резултати квантитативне ПЦР детекције флуоресценције могу се прикупити и анализирати флуоресцентним сигналима, тако да нема потребе да се отвара поклопац за електрофорезу након реакције, чиме се избегава контаминација ПЦР продуктом узрокована цурењем производа реакције у аеросоле.Ако повећате број отвора поклопца током корака пуњења гел електрофорезе, вероватно ће доћи до контаминације аеросолом.Препоручује се промовисање примене квантитативне ПЦР и постепено замењивање квалитативне ПЦР.
За ПЦР реакцију се користи УНГ анти-ПЦР систем контаминације производа.
Систем користи дУТП уместо дТТП.Након ПЦР реакције, сви ПЦР производи (ДНК фрагменти) су инкорпорирани са дУТП;у следећем кругу ПЦР реакције, ензим УНГ додат систему се инкубира на 37°Ц 5 минута пре ПЦР-а, који може специфично разградити све ДНК фрагменте који садрже дУТП, а затим извршити ПЦР реакцију.Ово може у потпуности уклонити аеросолну контаминацију узроковану ПЦР производима.Ефекат је приказан на слици испод:
Напомена: За директну ПЦР серију, можете одабрати серијске производе система за контаминацију анти-ПЦР производа компаније ФорегенеПредложи
За лабораторије које спроводе испитивање генотипизације великих размера, снажно се препоручује коришћење УНГ анти-ПЦР система контаминације производа за тестирање реагенса поред изградње разумних лабораторија.
Подсетник: Коришћење овог система не може да уклони већ проузроковану контаминацију ПЦР производа.Према томе, УНГ систем треба користити на почетку релевантног теста, а УНГ систем треба користити за ПЦР амплификацију, како би се спречила контаминација ПЦР производа Лажно позитиван.
Препоручљиво је користити Дирецт ПЦР-УНГ систем Форегене када се врши испитивање великих размера, као што су:
Плант Леаф Дирецт ПЦР Кит-УНГ;
Сет за директно ПЦР семе биљака-УНГ;
Комплет за директно ПЦР животињског ткива-УНГ;
Комплет за директни ПЦР реп миша-УНГ;
Зебра Фисх Дирецт ПЦР Кит-УНГ.
Ова серија комплета из Форегенане само да може брзо и у великим размерама да изврши ПЦР детекцију, већ и ефикасно спречи и контролише контаминацију ПЦР производа.
Време поста: 19.03.2021
