Олово

Дуга некодирајућа РНК, лнцРНА је некодирајућа РНК дужине веће од 200 нуклеотида, обично између 200-100000 нт.лнцРНА регулише експресију гена на епигенетском, транскрипционом и пост-транскрипционом нивоу, и учествује у утишавању Кс хромозома, утискивању генома и модификацији хроматина, активацији транскрипције, интерференцији транскрипције, нуклеарном транспорту, регулацији ћелијског циклуса, регулацији диференцијације ћелија и компензацији дозе, блиским ефектима регулације дозе и блиским процесима регулације дозе, спречавању многих других процеса компензације код људи. болести, и тренутно су једна од врућих тачака у области биомедицине.

01  Врсте и карактеристике ЛнцРНА

лнцРНА је подељена на многе типове према различитим изворима њеног формирања, као што је приказано на горњој слици.Има следеће карактеристике:

1. лнцРНА су обично дуже, са динамичком експресијом и различитим методама спајања током диференцијације
2. У поређењу са кодирајућим генима, лнцРНА обично има нижи ниво експресије
3. Већина лнцРНА има очигледну временску и просторну експресију специфичност у процесу диференцијације и развоја ткива
4. Карактеристични су изрази код тумора и других болести
5. Субцелуларне локације лнцРНА су разноврсне
6. Секвенца је ниска у очувању, али функција има одређени степен очуваности итд.

02 Често постављана питања о реверзној транскрипцији ЛнцРНА

Због ниског садржаја лнцРНА у ћелијама, дуге дужине и структуре високог нивоа, таква РНК често има сложене структуре као што су петље или укоснице, а РТ-кПЦР је склон проблемима неуспешне реверзне транскрипције или ниске ефикасности.

03 Решење за реверзну транскрипцију ЛнцРНА

У централном правилу, процес РНК вируса који користе сопствену реверзну транскриптазу за синтезу ДНК користећи РНК као шаблон назива се реверзна транскрипција.Процес коришћења реверзне транскриптазе РНК вируса за синтезу цДНК шаблона ин витро назива се реверзна транскрипција.Главни елементи укључени у систем реверзне транскрипције: РНК шаблон, реверзна транскриптаза, прајмери ​​и друге компоненте.

1.РНК шаблон

Утицај РНК шаблона на реверзну транскрипцију огледа се у његовој структури, чистоћи и интегритету.Што је већа чистоћа и интегритет екстраховане РНК, већа је ефикасност реверзне транскрипције и тачнији каснији квантитативни резултати.РНК пречишћена уобичајено коришћеним реагенсима за екстракцију РНК често садржи остатке соли алкохола и гванидина, који имају снажан инхибиторни ефекат на већину реверзне транскриптазе.

2.Реверзна транскриптаза

Реверзна транскриптаза има кључни утицај на цео систем реверзне транскрипције.Погодна температура за реверзну транскриптазу која се користи у већини лабораторија је генерално 42°Ц.У ствари, отварање структуре РНК високог нивоа захтева вишу температуру, а захтеви за реверзном транскриптазом су већи.

3.Пример

Прајмери ​​за реверзну транскрипцију укључују прајмере специфичне за ген, насумичне прајмере и Олиго дТ прајмере.Већина лнцРНК не садржи полиА репове, и важно је правилно ускладити насумичне прајмере са Олиго дТ.

4.Остале компоненте

С обзиром на чињеницу да је РНК посебно лако разградити, увођење компоненти у систем реверзне транскрипције може се свести на минимум, што може ефикасно спречити улазак РНК-азе и обезбедити несметан напредак реверзне транскрипције.

Fорегендобија из РНК шаблона, реверзна транскрипција у кПЦР

Свеобухватно пратите своју детекцију лнцРНА

Укупна РНК животиња ИсолатионКомплет (са колоном за уклањање гДНК)

Укупна ћелијска РНК ИсолатионКомплет (са колоном за уклањање гДНК)

Лнц-РТ ХероТМ И (са гДНазом) (супер премикс за синтезу првог ланца цДНК из лнцРНА)

ПЦР у реалном времену ЕасиТМ-СИБР Греен И

Aдвантагес ofЕкстракција РНК:

Комплет користи технологију екстракције РНК треће генерације, нема потребе за употребом ДНазе.

11 минута из ћелија култивисаних на плочи са 96, 24, 12 и 6 јажица, високоефикасна екстракција РНК без гДНК, високе чистоће, висококвалитетне укупне ћелијске РНК.

Предности реверзне транскрипције лнцРНА:

Систем реверзне транскрипције специјално развијен за ЛнцРНА за брзо уклањање контаминације геномске ДНК.

Систем реверзне транскрипције има високу термичку стабилност и још увек има добре перформансе реверзне транскрипције на 50°Ц.

Шаблони са високим садржајем ГЦ и сложеном секундарном структуром могу се обрнути са великом ефикасношћу.

Предностиof qПЦР:

Хот старт Форегене Так полимераза има већу ефикасност амплификације, већу осетљивост на појачање и већу специфичност амплификације

Оптимизовани Реал ПЦР Еаси Мик чини да СИБР Греен И има већу осетљивост детекције, а његов интензитет флуоресценције је 3-5 пута већи од сличних производа, што може задовољити потребе различитих типова квантитативних експеримената флуоресценције.