Колико знаш

О Некстракција уклеинске киселине

Почетак и крај пречишћене нуклеинске киселине

Све је тешко на почетку, пречишћена нуклеинска киселина је највише

Покретање молекуларних експеримената, за накнадне експерименте

Успех или неуспех има пресудан утицај.

УВ спектрофотометар у траговима/ултра-траговима фаворизују многи научни истраживачи јер може једноставно, брзо и економично да открије концентрацију нуклеинске киселине и остатке протеина и јона соли.

Као што сви знамо, А260 значи ОД вредност апсорпције нуклеинске киселине, А280 значи ОД вредност апсорпције концентрације протеина, А230 значи ОД вредност апсорпције концентрације јона соли, тако да А260 може да конвертује концентрацију нуклеинске киселине, А260/280 значи протеински остатак, А260/230 значи да је јон соли само на основу резултата мерења, али откривено је на основу резултата истраживања.конвенционални” да верује да може објаснити чистоћу ДНК и РНКодређеној мери.То није једини стандард за идентификацију приноса и чистоће нуклеинске киселине, користи се само као референца и није „златни стандард“.

Упутство за Тхермо Фисхер НД-2000 наглашава поузданост резултата теста

Разлог је тај што резултати добијени коришћењем микро/ултрамикро УВ спектрофотометра само са стране одражавају принос и чистоћу нуклеинске киселине, а постоји много фактора који утичу (оптички пут, запремина узорка, концентрација узорка, пХ вредност, други јони који утичу на мерење апсорбанције итд.), измерена вредност ОД није нужно тачна.Истовремено, због недостатка специфичности материјала за одређивање вредности апсорпције, једноланчана ДНК, дволанчана ДНК, РНК, дНТП и неки протеини сви имају апсорпционе врхове на таласној дужини од 260 нм, а концентрација одређена само А260 није нужно права ДНК или РНК.Концентрација, њен интегритет и деградација се не могу судити.

Како онда проценити квалитет наше пречишћене нуклеинске киселине?Поред коришћења микро/ултрамикро УВ спектрофотометра за детекцију, потребне су и методе као што је електрофореза у агарозном гелу да би се визуелно приказала чистоћа и интегритет нуклеинске киселине и да би се у одређеној мери показала концентрација.На овај начин је веродостојан принос и чистоћа нуклеинске киселине добијени из резултата детекције различитих метода.

Експериментално поређење графикона

Геномска ДНК ћелија Х1299 је екстрахована коришћењем комплета за екстракцију ДНК компаније А и примећена је значајна контаминација нечистоћама, што је резултирало високим вредностима ОД

(вредност мерења ОД и одговарајући електроферограм)

Индекс евалуације

Да ли постоји „златни стандард“ за тестирање приноса нуклеинске киселине и квалитета?

Колико знамо, не постоји једноставан, брз и јефтин метод.Било да се ради о спектрофотометру, гел електрофорези или масеној спектрометрији, сви они одражавају концентрацију и чистоћу нуклеинске киселине у раствору са различитих аспеката, и треба их проценити упућивањем једни на друге.

Најбољи индекс евалуације је увекнакнадну експерименталну примену.Не утиче на ефикасност реверзне транскрипције и ПЦР амплификације.Добијање поузданих продуката амплификације и вредности Цт, и добијање комплетне секвенце секвенцирањем је успешна екстракција нуклеинске киселине.

Да сумирамо, поглед на теорију само омјера требало би да буде оспорен ставом о „коришћењу добрих експерименталних резултата низводно као добрих параметара екстракције“!

Препоручени комплети за екстракцију ДНК РНК Форегене за постизање високе чистоће ДНК/РНА:

хттпс://ввв.фореивд.цом/реагент/дна-исолатион-сериес/

хттпс://ввв.фореивд.цом/реагент/рна-исолатион-сериес/