Лабораторијско испитивање почиње узимањем узорака, а прикупљање узорака је најлакше превидети.Најважнија ствар за прикупљање узорака је одабрати исправан тип узорка, користити одговарајуће алате за узорковање и извршити разуман транспорт и обраду.

И. Тип узорка

Уобичајени типови узорака су следећи:

Метода узорковања може се односити на техничке спецификације за праћење стања животне средине новог корона вируса на пољопривредном (чаршијском) тржишту”:

1. Узмите узорке бриса из грла, руку, одеће и других предмета практичара: потребно је користити раствор за конзервацију вируса у епрувети за узорковање вируса и потпуно инфилтрирати памучне брисеве за узорковање.Површина тла) се више пута наноси и испира више од 3 пута.Истовремено, потребно је извршити вишетачкасто дистрибуирано узорковање на површини узоркованог објекта.

2. Узорци површинских брисева хране: Узорци хране се не могу директно сакупљати.Храну која се сакупља треба пажљиво одвојити и чувати у чистој врећи за узорковање пре узимања узорака бриса.Потребно је користити раствор за конзервацију вируса у епрувети за узорковање вируса, након потпуног намочења памучног штапића за узорковање, више од 3 пута размазати и испрати површину узорка хране за прикупљање.Истовремено, потребно је извршити вишетачкасто дистрибуирано узорковање на површини узорка.

3. Узорци канализације: У складу са дистрибуцијом система за одводњавање на тржишту, изаберите 2-3 локације за узорковање отпадних вода, фокусирајући се на сакупљање унутрашње цевне мреже, низводно од правца тока воде или везу са општинском мрежом цеви.Да бисте сакупили узорак штапића, уроните га у канализацију помоћу памучног штапића за узорковање да би он адсорбовао канализацију и исперите га у цеви за узорковање више од 3 пута.За прикупљање узорака канализације користите полиетиленске пластичне боце за прикупљање узорака отпадне воде од 30-500 мЛ;за сакупљање отпадних вода запремине веће од 500 мЛ, могу се користити полиетиленске пластичне канте или посебна опрема за обогаћивање узорака воде на лицу места.Истовремено, потребно је спровести дистрибуирано узорковање на више тачака за локацију узорковања отпадних вода.

4. Узорци животиња: За живе животиње, брисеви за узорковање се могу користити за прикупљање брисева површине тела, орофарингеалних брисева и аналних брисева, а узорци измета или секрета се такође могу сакупљати и бележити у складу са тим на картонском листу.За узорке животиња које су биле подвргнуте уклањању коже итд., користите памучне брисеве да бисте сакупили узорке бриса са површине тела и телесне шупљине.Потребно је користити раствор за конзервацију вируса у епрувети за узорковање вируса да би се у потпуности инфилтрирао памучни штапић за узорковање, а затим поновити наношење површине узорка хране који се узима.Шабу више од 3 пута.Истовремено, потребно је извршити вишетачкасто дистрибуирано узорковање на површини узорка.

5. Остали уређаји: контејнери за транспорт и узгој животиња као што су кавези или акваријуми.Прво, посматрајте или разумејте специфичне врсте животиња које се чувају и узгајају у контејнеру и сакупите узорке бриса на унутрашњем зиду контејнера или течне узорке садржаја.

6. Прикупите узорке аеросола у просторима где се људи окупљају, слабо проветреним локалним трговачким просторима, канцеларијама и тоалетима.

ИИ. Алати за узорковање
1. Цев за сакупљање крви
Ако касније треба да урадите тестирање нуклеинске киселине и узорке антикоагуланса, препоручује се коришћење вакуумског крвног суда који садржи ЕДТА антикоагуланс за сакупљање крви;за узорке серума препоручује се употреба вакуумског крвног суда без антикоагуланса.

2. Брис за узорковање

Препоручује се употреба полипропиленских брисева уместо брисева од калцијум алгината или брисева са дрвеним моткама, јер могу да садрже супстанце које инактивирају одређене вирусе и инхибирају ПЦР тестирање.Брисићи са памучним главама се не могу користити, јер памучна влакна имају јаку адсорпцију протеина и није лако елуирати у следећи раствор за конзервацију.

У „Техничким спецификацијама за мешовито сакупљање и откривање нових нуклеинских киселина 10-у-1” јасно је наведено да „брис за узорковање треба да буде направљен од полиестера, најлона и других непамучних и некалцијум алгинатних материјала, а дршка од недрвеног материјала.Тачка лома је око 3 цм од врха главе штапића, што је лако сломити.”

ЦДЦ у Сједињеним Државама је такође поменуо „Користите само тампоне од синтетичких влакана са пластичним или жичаним осовинама.Немојте користити брисеве од калцијум алгината или брисеве са дрвеним дршкама,јер могу да садрже супстанце које инактивирају неке вирусе и инхибирају ПЦР тестирање.

Тренутно се широко користи стерилни најлонски штапић за једнократну употребу у комбинацији са пластичном шипком.Тампон за флоцкинг има бољу апсорпцију воде и брзину ослобађања.Према различитим местима узорковања, глава бриса такође има различите величине и влакна.Дебљина.”

3. Решење за очување транспорта узорка

Решење за очување инактивације вируса: одговарајућа количина концентрације гванидинске соли и разних компоненти за лизу вируса могу директно лизирати вирус да би ослободили нуклеинску киселину, инактивирали РНазу и ДНазу и осигурали интегритет нуклеинске киселине, која се може користити за накнадну кПЦР детекцију.Не може се користити за култивацију и изолацију вируса.

Раствор за транспорт и очување вируса: садржи соли, аминокиселине, витамине, глукозу и протеине потребне за опстанак вируса, који могу да одрже активност вируса.Може се користити за екстракцију нуклеинске киселине и детекцију вируса у будућности, а може се користити и за култивацију и одвајање вируса.

4. Епрувета за очување узорка и врећа за узорке

Епрувета за складиштење узорака треба да буде стерилна пластична епрувета са поклопцем на навој који не адсорбује нуклеинску киселину.Свака епрувета за узорке треба да буде покривена врећом за узорке како би се спречило цурење и контаминација узорка.

ИИИ.Интерферирајуће супстанце у узорку

Интерферентне супстанце у ПЦР експериментима

1. ендогени интерферент

Супстанце присутне у узорку тела могу да ометају откривање других супстанци.

Крв:хем (>1мг/мл), хемин (>0,1нг/μл), триглицериди, ИгГ, итд.;

Урин:Уреа (20 мМ);

столица:биљни полисахариди, холат;

ткиво:протеаза, колаген;

Млеко: протеаза, јон калцијума;

Дроге: антибиотици, антивирусни лекови, хормони итд.

друго.

2. егзогени интерферент

Долази од супстанци које могу да ометају откривање других супстанци ин витро.Адитиви за узорке и супстанце које се могу контактирати током сакупљања и обраде узорака:

Тест залихе: гел за одвајање серума, контејнер за сакупљање узорака и гумени чеп, катетер, течност за испирање катетера, прах за рукавице итд.

Антикоагулант: хепарин (>0,1 У/мЛ), ЕДТА (>0,5 мМ), итд.;

Органски растварачи: изопропанол (>0,1 ИУ/мл), бетаин, диметил сулфоксид, формамид, глицерин, ПЕГ, итд.;

Средства за дезинфекцију: алкохоли (етанол>1%), алдехиди, феноли (фенол>0,2%), пероксиди, јаке киселине (ХЦЛ), јаке алкалије (НаОХ) итд.;

Детерџент:СДС (>0,005%);

Земљиште: Хумус

Боја: Индиго

друго.

У стварним условима узимања узорака на отвореном, као што је сакупљање узорака животне средине, узорци могу садржати различите ометајуће супстанце, а састав ометајућих супстанци на свакој локацији је различит, што захтева да се експерименти с ПЦР сметњама спроводе у складу са локалним условима.

ИВ.Услови складиштења и транспорта узорака

Свеже сакупљене клиничке узорке треба послати у лабораторију у року од 2 до 4 сата након сакупљања на температури од 2°Ц до 8°Ц.Чувати на 4℃ у року од 24х.Узорке који се користе за изолацију вируса и детекцију нуклеинске киселине треба тестирати што је пре могуће.Узорци који се могу тестирати у року од 24 сата могу се чувати на 4°Ц;узорке који се не могу открити у року од 24 сата треба чувати на -70°Ц или ниже (ако не- Чувати на 70°Ц у фрижидеру на -20°Ц).

резиме:Стандардизовано сакупљање, транспорт и складиштење узорака су од суштинског значаја за накнадно тестирање.Лажни негативни резултати многих лабораторијских тестова су узроковани неправилним прикупљањем, транспортом и складиштењем узорака који доводе до разградње вирусне нуклеинске киселине.Међутим, многе лабораторије и даље игноришу важност узорковања.Надам се да овај чланак може пробудити свачију пажњу на узорковање и направити научније и разумније узорковање!

Сродних производа:

Комплет за откривање нуклеинских киселина варијанте САРС-ЦоВ-2 (И) (Мултиплекс ПЦР метода флуоресцентне сонде) – за откривање мутаната из Бразила, Јужне Африке и УК