Недавно сам открио нешто невероватно!Многи напредни професионалци за експерименте око њега не знају чак ни неке основне експерименталне тачке знања.

На пример, можете ли одговорити на следећа питања?

Да ли постоји разлика између ОД260 и А260?Шта значи сваки?
ОД је скраћеница од оптичке густине (оптичка густина), А је скраћеница од апсорпције (апсорбанца), два концепта су заправо иста, „оптичка густина“ је „апсорбанца“, али „оптичка густина“ је у складу са већином националних стандарда и више је стандардизована.

Обично меримо ОД вредност на 260нм да бисмо израчунали концентрацију нуклеинске киселине, па шта представља 1ОД?
Нуклеинска киселина има максимум апсорпције на таласној дужини од 260 нм, која садржи и ДНК и РНК, као и фрагментиране фрагменте нуклеинске киселине (ово је кључна тачка).
Вредност ОД мерена на таласној дужини од 260 нм забележена је као ОД260.Ако је узорак чист, вредност ОД260 може израчунати концентрацију узорка нуклеинске киселине.
1 ОД260=50 μг/мл дсДНК (дволанчана ДНК)
=37 μг/мл ссДНК (једноланчана ДНК)
=40 μг/мл РНК
=30 μг/мл дНТПс (олигонуклеотиди)
Да ли постоји икаква веза и разлика између РТ-ПЦР, Реалтиме-ПЦР и КПЦР?
РТ-ПЦР је скраћеница од реверзне транскрипције ПЦР
ПЦР у реалном времену=кПЦР, скраћеница за квантитативни ПЦР у реалном времену
Иако се чини да су ПЦР у реалном времену (флуоресцентни квантитативни ПЦР у реалном времену) и ПЦР са реверзном транскрипцијом (ПЦР са реверзном транскрипцијом) скраћено као РТ-ПЦР.Али међународна конвенција гласи: РТ-ПЦР се посебно односи на ПЦР са реверзном транскрипцијом.

Који су најчешће коришћени нт, бп и кб за описивање дужине ДНК/РНА у биологији?
нт = нуклеотид
бп = базни пар базни пар
кб = килобаза

Наравно, рекли бисте да многи људи не маре за ове ситне детаље!Сви то раде, и нико вас неће питати шта је то.Знате да је ово непотребно, зар не?

Не, не, не, ово је веома неопходно знати!због чега?
Зато што желите да објавите чланак!брате!Било да циљате на дипломирање или на научноистраживачка достигнућа, морате се ослонити на чланке да бисте говорили!

Екстракција нуклеинске киселине треба да буде најједноставнији и најосновнији експеримент.Квалитет екстракције нуклеинске киселине директно одређује резултате накнадних експеримената.

Иако сам то рекао много пута, још увек има много пријатеља којима је свеједно.Овај пут сам одлучио да се померим из чланка!

Минималне информације за објављивање квантитативних ПЦР експеримената у реалном времену, који се називају МИКЕ, је скуп смерница за квантитативне експерименте флуоресценције објављених на међународном нивоу, који предлажу минималне стандарде за експерименталне информације неопходне за процену флуоресцентних квантитативних ПЦР експеримената и објављивање чланака.Кроз експерименталне услове и методе анализе које обезбеђује експериментатор, рецензенти могу боље да процене валидност експерименталне шеме истраживача.

Може се видети да су у делу екстракције нуклеинске киселине предложене следеће детекције,

„Е“ означава информације које се морају обезбедити, а „Д“ означава информације које треба да буду обезбеђене ако је потребно.

Форма је веома компликована, у ствари, желим да кажем да сви треба да почну

чистоћу (Д), принос (Д), интегритет (Е) и конзистентност (Е) за процену нуклеинских киселина у ова четири аспекта.

Према експерименталним навикама, прво разговарајте о методама оцењивања чистоће и концентрације.

Мерење ОД је омиљени и најлакши метод детекције за експериментаторе.Што се тиче принципа, овде нећу улазити у детаље.Многе лабораторије сада користе ултра-микро спектрофотометре да директно квантитативно анализирају узорке нуклеинске киселине.Док приказује вредност апсорпције, програм директно даје вредност концентрације (нуклеинске киселине, протеина и флуоресцентне боје) и повезане односе.Што се тиче анализе ОД вредности, сачувајте ову слику и бићете добро.

Листа решења универзалне вредности ОД

Међутим, постоји неколико упозорења које треба издвојити за вас.

(Уосталом, знам да сте ви они који штеде и чекају док вам затребају!)

Напомена 1 Опрема

На вредност ОД ће утицати различита опрема.Све док је ОД260 унутар одређеног опсега, вредности ОД230 и ОД280 су значајне.На пример, опсег апсорпције уобичајеног Еппендорф Д30 на 260нм је 0~3А, а НаноДроп Оне од Тхермо је на 260нм.Опсег апсорпције од 0,5~62,5А.

Ноте 2Реагенс за разблаживање

На вредност ОД може утицати разблаживање различитих реагенаса.На пример, ОД260/280 очитавање пречишћене РНК у пХ7,5 10мМ Трисбафер је између 1,9-2,1, док је унеутрални водени раствороднос ће бити мањи, можда само 1,8-2,0, али то не значи да се квалитет РНК мења.

Напомена 3Преостале супстанце

Постојање резидуалних супстанци утицаће на тачност мерења концентрације нуклеинских киселина, па је неопходно што је могуће више избегавати остатке протеина, фенола, полисахарида и полифенола у узорцима нуклеинских киселина.

Међутим, у ствари, екстракција органским реагенсима је стара метода.У комерцијалним комплетима, ефекат екстракције се може постићи кроз адсорпциону колону на бази силицијум-диоксида у комбинацији са центрифугирањем, избегавајући токсичне и штетне органске реагенсе које је тешко уклонити, итд. Проблем, као нпр.Форегенеов комплет за екстракцију нуклеинске киселине не користи ДНазу/РНазу и токсичне органске реагенсе током операције, брзо и безбедно, анд тхеефекат јеДобро(случајно је рекао да је ћелав, али знам да желите да знате).

Пример 1: Принос и чистоћа екстракције геномске ДНК

Комплет за изолацију ДНК Форегене земљишта (ДЕ-05511) третира узорке земљишта из различитих извора, а количина и чистоћа добијене геномске ДНК приказани су у следећој табели:
Пример 2: Принос и чистоћа екстракције РНК ткива

Комплет за изолацију укупне РНК животиња (РЕ-03012) обрадио је различите узорке ткива, а количина и чистоћа добијене РНК приказани су у табели испод (за ткиво миша):
Међутим, немојте мислити да сте завршили са ОД вредношћу.Да ли се бринеш о кључним тачкама које сам ти нацртао напред?

Објава

Фрагментирани молекули нуклеинске киселине ће такође бити израчунати у апсорбанцији.Под претпоставком да имате остатке геномске ДНК у РНК, ваша ОД вредност ће изгледати веома висока, али стварна концентрација РНК се не може одредити.Да ли је ваша РНК Није јасно да ли постоји деградација, тако да нам је и даље потребан свеобухватан метод евалуације да бисмо дали тачнију процену, односно процену интегритета нуклеинске киселине поменуту у МИКЕ.