• Фејсбук
  • линкедин
  • ЈуТјуб

ПЦР методе и контаминација аеросолом нуклеинске киселине у лабораторијама за тестирање нуклеинских киселина су као две стране новчића.Можемо само да бирамо да га имамо или не, али не можемо да бирамо да ли хоћемо или трошимо.

загађење1

1. Скрининг средства за уклањање ДНК

Да би се постигло просторно уклањање аеросолне контаминације нуклеинском киселином, прво је потребно издвојити средства за уклањање ДНК који могу уклонити нуклеинске киселине у течном стању.Зато што нема много средстава за уклањање ДНК који заиста раде.За експерименталну методу погледајте: Уклањање ДНК не може бити "тајни кутак" лабораторије!

У овом експерименту, 100 копија/μЛ (ЦТ приближно 31) АСФВ плазмида и средства за уклањање ДНК квантификованих дигиталним ПЦР-ом помешано је у једнаким запреминама, а затим реаговано на собној температури 10 мин, 20 мин и 30 мин.Након екстракције нуклеинске киселине, извршена је кПЦР амплификација.Упоређена је позитивна контрола помешана са плазмидом и водом.Пошто експеримент није завршен у исто време, може доћи до извесног одступања између резултата, али то не утиче на закључак експеримента.До сада сам проценио 10 комерцијалних производа за уклањање ДНК.Само производи бр. 1, бр. 6 и бр. 8 могу ефикасно разградити плазмидну ДНК у течном стању.Остали производи готово да немају ефекта.

Табела 1 Ефекат уклањања нуклеинске киселине комерцијално доступног средства за уклањање ДНК

загађење2

2. Експеримент са ефектом уклањања ДНК најчешће коришћених дезинфекционих средстава

1. Скрининг најчешће коришћених дезинфекционих средстава

Постоји много врста дезинфекционих средстава која се обично користе у лабораторијама: алдехиди, феноли, алкохоли, кватернарне амонијумове соли, пероксиди, препарати хлора и киселине и базе.Дезинфекциони ефекти ових дезинфекционих средстава на микроорганизме су у потпуности верификовани експериментима, али нема довољно експерименталних података о ефекту разградње нуклеинских киселина.Лабораторијама за тестирање нуклеинске киселине потребно је средство за дезинфекцију које не само да има добар дезинфекциони ефекат на микроорганизме, већ може и да разгради ДНК.Резултати испитивања показују да само два препарата хлора од 84 дезинфекционог средства и трихлороизоцијанурне киселине и 1 М хлороводоничне киселине испуњавају услове.Пошто је 1 М хлороводонична киселина веома корозивна, препоручује се да се препарати хлора користе као отпад у лабораторијама за испитивање нуклеинских киселина.Међутим, препарати хлора су корозивни за метале и не могу се користити за дезинфекцију инструмената и опреме.

Табела 2 Ефекти уклањања ДНК различитих врста дезинфекционих средстава

загађење3

2. Минимална ефективна концентрација препарата хлора

Средства за дезинфекцију на бази хлора имају снажан ефекат деградације ДНК, али због њихове корозивности и иритације метала, могу се користити за чишћење пода, неметалних радних плоча, врхова за намакање, епрувета за центрифугирање и других тестних предмета.

Према „Техничким смерницама за дезинфекцију епидемије коронарне пнеумоније“: Загађивачи (крв пацијената, секрети и повраћање) доступан хлор 5г/Л-10г/Л дезинфекционо средство које садржи хлор;подови, зидови и површине објеката користе доступно средство за дезинфекцију хлора 1г/Л: одећа, постељина и други текстил се прво натапају дезинфекционим средством за хлор са 0,5г/Л доступног хлора 30 минута, а затим се чисте као и обично.

Табела 3. Ефекат уклањања ДНК различитих концентрација средства за дезинфекцију хлора

загађење4

Резултати испитивања показују да: када је ефективна концентрација хлора већа или једнака 1,2 г/Л, дезинфекционо средство које садржи хлор може у потпуности да разгради 100 копија/μЛ плазмида када се користи 5 минута.Када делује 10 минута, 84 дезинфекционо средство са ефективном концентрацијом хлора већом или једнаком 0,6 г/Л може у потпуности да разгради 100 копија/μЛ плазмида.

3. Експеримент уклањања ваздуха загађеног аеросолом нуклеинске киселине

Како очистити ваздух загађен аеросолима нуклеинске киселине?Већина мисли је да се створи окружење контаминирано аеросолом, а затим да се очисти, или да се очисте нуклеинске киселине након контаминације.За мене је бесмислен експеримент који се не може поновити и резултати експеримента не могу квантитативно анализирати, па сам позајмио неке методе дезинфекционе дезинфекције ваздуха.Погледајте „ГБ27948-2020 Општи захтеви за средства за дезинфекцију ваздуха“ и „Техничке спецификације за дезинфекцију“

1. Испитни материјали

1.1 Одстрањивач ДНК: У овом експерименту одабрана су два комерцијално доступна средства за уклањање ДНК 6 и 8 у Табели 1.

1.2 Тест плазмида: С обзиром да ће ЦТ вредност већине лабораторијских загађења бити већа од 30, концентрација плазмида гена АСФВ коришћеног овог пута је око 100 копија/μЛ, а флуоресцентни квантитативни ПЦР ЦТ је око 31,07.Додајте плазмид у памучни штапић и осушите на ваздуху.

загађење5

1.3 Инструмент за тестирање: Билингкехан КВБОКС инструмент за дезинфекцију, који је љубазно подржан од стране Схензхен Рунлиан Енвиронментал Тецхнологи Цо., Лтд., има одличне перформансе дезинфекције ваздуха са средством за дезинфекцију водоник-пероксида и може ефикасно да убије споре и друге микроорганизме.

загађење6

1.4 Простор за тестирање: затворени прозор за пренос од око 0,1 кубни метар.

2. Метода испитивања

загађење7

Количина дезинфекционог средства постављена на машини за дезинфекцију је 10мл, а концентрација је 100мл/м3, што је много више од "ГБ27948-2020 Општи захтеви за дезинфекциона средства за ваздух": када се користи дезинфекција аеросол спрејом, количина дезинфекционог средства треба да буде ≤10 мл/м

загађење8
загађење10
загађење9
загађење11

Након прскања, запечаћен је 2 сата, а затим је натопљени брис са плазмидом елуиран са ТЕ, а натопљени брис са плазмидом без фумигације је постављен као контрола.Користите флуоресцентну квантитативну ПЦР методу за детекцију.

Табела 4 Резултати теста уклањања нуклеинске киселине из ваздуха

загађење12

3. Резултати испитивања

Две врсте средстава за уклањање ДНК који могу ефикасно деградирати плазмиде у течном стању немају никакав ефекат у експерименту уклањања нуклеинске киселине у ваздуху.Радујем се проналажењу решења које се може користити за уклањање загађења аеросола нуклеинском киселином у ваздуху да би се у потпуности решио проблем загађења аеросола нуклеинским киселинама у лабораторијама за испитивање нуклеинских киселина, али за сада такав производ није пронађен.Верујем да ће у будућности постојати одстрањивачи нуклеинских киселина високих перформанси који се могу користити за уклањање нуклеинских киселина из ваздуха.

4. Одустаните од илузија и фокусирајте се на превенцију

Без обзира на то како се компаније хвале својим производима за уклањање нуклеинских киселина, предлажем да већина пријатеља који се баве тестирањем нуклеинских киселина одустану од илузија једном за свагда и препознају реалност: веома је тешко уклонити ваздух загађен аеросолима нуклеинских киселина, или предузети солидну превентивну меру и свакодневно праћење!

загађење13


Време поста: 10.09.2021