Савети за побољшање опоравка лепка

1. Повећајте оптерећење узорка током електрофорезе.

2. Користите свеже припремљен пуфер за електрофорезу.

3. Када сечете лепак, покушајте да исечете само лепак тракама да бисте смањили обим сечења лепка: лепак са неколико фрагмената није потребан, иначе ће утицати на брзину опоравка.

4. Након што отопите два или више комада лепка, користите епрувету без обзира колико је запремине и пренесите је у исту колону.

5. Раствор који се додаје у сол може бити мало више, што је погодније за везивање ДНК за мембрану, али генерално не прелази 750ул.

6. Кључ за опоравак гела је везивање ДНК за колону кроз концентрацију соли, киселост (наелектрисање) и хидрофобност раствора у колони.Стога, ако је пХ пуфера за електрофорезу превисок, 10ул (пХ 5,0, 3мол/Л НаАЦ) се може додати у сол;да би се боље пресрели ДНК молекули на мембрани, 30% изопропанола се може додати да се загреје у течност након растварања лепка.

7. Пре додавања елуента, оставите колону на собној температури неколико минута (око 10 минута) да би етанол потпуно испарио.

8. На крају, додајте мање елуента да бисте смањили запремину за опоравак.Генерално, за елуирање се користи 30-50μл елуента (не премало, иначе неће моћи да навлажи мембрану, што не погодује елуирању);капљице за елуирање су у центру мембране, да би се у потпуности елуирала ДНК везана за мембрану.

9. Након додавања елуента, може се елуирати у воденом купатилу од 55 степени 5 минута или ставити у водено купатило од 50 степени дуже од 10 минута, или запечаћено парафилмом на 4 степена преко ноћи, а затим центрифугирано за опоравак следећег дана, ефекат је добар.

10. Додати центрифугирани елуат назад у адсорпциону колону и поново центрифугирати.

Детаљне методе и процедуре за добијање ПЦР производа

1. Обична рециклажа гуме

Ако желите да повратите лепак, најбоље је да користите комплет, који је згодан и има нешто већу стопу опоравка.Ако заиста морате да га опоравите ручно, можете додати 3 пута већу запремину од ТЕ након сечења лепка.После топљења у воденом купатилу, фенол, фенол/хлороформ се екстрахују чисто, а етанол се исталожи.То је то.

2. Опоравак ДНК из гелова ниске тачке топљења

Пречишћавање фрагмената ДНК Додајте ТЕ (10 ммол/л Трис-ХЦл пХ8,0, 0,1 ммол/л ЕДТА) једнак запремини гела, и ставите у водено купатило на 65°Ц 5 минута да се гел потпуно раствори.

Након што је доведена до собне температуре, додата је једнака количина фенола (засићена ТЕ, ТЕ је затворен у горњем слоју, а доњи слој фенола је уклоњен) и смеша је лагано измешана (није потребно мешање) и центрифугирана на 12.000 рпм током 3 минута.Поновите 1-2 пута.

Узмите супернатант, додајте 0,1 запремину 3мол/Л натријум ацетата (пХ 5,2) и 2,5 пута запремину апсолутног етанола да бисте извршили преципитацију етанолом.Пречишћену ДНК растворите одговарајућом количином ТЕ, измерите садржај и припремите за употребу (може се користити за анализу структуре циљног гена, припрему сонде итд.).

3. ПЦР опоравак са добром специфичношћу амплификације

Ако је специфичност ПЦР амплификације добра, то је само једноставно пречишћавање и опоравак ПЦР производа.Можете додати 50 уг/мл протеиназе К у ПЦР производ, 37 степени током 1 сата, једном екстраховати фенолом/хлороформом, једном екстраховати хлороформом и додати 0,1 запремину супернатанта.Натријум ацетат је добијен преципитацијом са 2,5 запремине апсолутног етанола.

Сродни производи:

хттпс://ввв.фореивд.цом/пцр-пурифицатион-кит-2-продуцт/

хттпс://ввв.фореивд.цом/блоод-супердирецттм-пцр-кит-едта-продуцт/