Антитела, такође названа имуноглобулини (Иг), су гликопротеини који се специфично везују за антигене.
 
Конвенционални препарати антитела се производе имунизацијом животиња и прикупљањем антисерума.Стога, антисерум обично садржи антитела против других неповезаних антигена и других протеинских компоненти у серуму.Општи молекули антигена углавном садрже више различитих епитопа, тако да су конвенционална антитела такође мешавина антитела против више различитих епитопа.Чак су и конвенционална серумска антитела усмерена против истог епитопа и даље састављена од хетерогених антитела произведених од стране различитих клонова Б ћелија.Стога се конвенционална серумска антитела називају и поликлонска антитела, или скраћено поликлонска антитела.
 
Моноклонско антитело (моноклонско антитело) је високо униформно антитело које производи један клон Б ћелије и усмерено је само против специфичног епитопа.Обично се припрема хибридомском технологијом—технологија хибридомских антитела заснована је на технологији фузије ћелија, комбинујући Б ћелије са способношћу да луче специфична антитела и ћелије мијелома са бесконачним капацитетом раста у Б-ћелијске хибридоме.Ова ћелија хибридома има карактеристике родитељске ћелије.Може да се размножава неограничено и бесмртно ин витро попут ћелија мијелома, и може да синтетише и лучи специфична антитела попут лимфоцита слезине.Клонирањем се може добити моноклонска линија изведена из једне ћелије хибридома, односно хибридома ћелијска линија.Антитела која производи су високо хомогена антитела против исте антигене детерминанте, односно моноклонских антитела.
 
Антитела постоје као један или више мономера у облику слова И (тј. моноклонска антитела или поликлонска антитела).Сваки мономер у облику слова И се састоји од 4 полипептидна ланца, укључујући два идентична тешка ланца и два идентична лака ланца.Лаки и тешки ланци су именовани према њиховој молекулској тежини.Врх структуре у облику слова И је варијабилни регион, који је место везивања антигена.(Извод из Детаи концепта био-моноклоналних антитела)
 
Структура антитела
Тешки ланац
Постоји пет типова тешких Иг ланаца сисара, названих грчким словима α, δ, ε, γ и μ.Одговарајућа антитела се зову ИгА, ИгД, ИгЕ, ИгГ и ИгМ.Различити тешки ланци се разликују по величини и саставу.α и γ садрже приближно 450 амино киселина, док μ и ε садрже приближно 550 аминокиселина.
Сваки тешки ланац има два региона: константни регион и варијабилни регион.Сва антитела истог типа имају исти константни регион, али постоје разлике између антитела различитих типова.Константни региони тешких ланаца γ, α и δ се састоје од три Иг домена у тандему, са зглобним регионом за повећање његове флексибилности;константни региони тешких ланаца μ и ε су састављени од 4 Иг домена.Варијабилни регион тешког ланца антитела који производе различите Б ћелије је различит, али варијабилни регион антитела произведен од исте Б ћелије или ћелијског клона је исти, а варијабилни регион сваког тешког ланца је дугачак око 110 аминокиселина., И формирају један Иг домен.
 
Лаки ланац
Постоје само два типа лаких ланаца код сисара: ламбда тип и капа тип.Сваки лаки ланац има два повезана домена: константни регион и варијабилни регион.Дужина лаког ланца је око 211~217 аминокиселина.Два лака ланца садржана у сваком антителу су увек иста.За сисаре, лаки ланац у сваком антителу има само један тип: капа или ламбда.Код неких нижих кичмењака, као што су хрскавице (рибе хрскавице) и коштане рибе, налазе се и друге врсте лаких ланаца као што је тип јота (јота).
 
Фаб и Фц сегменти
Фц сегмент се може директно комбиновати са ензимима или флуоресцентним бојама за обележавање антитела.То је део где се антитело закива на плочи током ЕЛИСА процеса, а такође је и део где се друго антитело препознаје и везује у имунопреципитацији, имуноблотингу и имунохистохемији.Антитела могу бити хидролизована у два Ф(аб) сегмента и један Фц сегмент помоћу протеолитичких ензима као што је папаин, или се могу разбити из зглобног региона пепсином и хидролизовати у један Ф(аб)2 сегмент и један Фц сегмент.Фрагменти ИгГ антитела су понекад веома корисни.Због недостатка Фц сегмента, Ф(аб) сегмент неће преципитирати са антигеном, нити ће га имуне ћелије ухватити у ин виво студијама.Због малих молекуларних фрагмената и недостатка функције унакрсног повезивања (због недостатка Фц сегмента), Фаб сегмент се обично користи за радиообележавање у функционалним студијама, а Фц сегмент се углавном користи као блокирајуће средство у хистохемијском бојењу.
 
Променљиви и константни региони
Варијабилни регион (В регион) се налази на 1/5 или 1/4 (садржи око 118 аминокиселинских остатака) Х ланца близу Н-терминуса и 1/2 (који садржи око 108-111 аминокиселинских остатака) близу Н-краја Л ланца.Сваки В регион има пептидни прстен формиран дисулфидним везама унутар ланца, а сваки пептидни прстен садржи приближно 67 до 75 аминокиселинских остатака.Састав и распоред аминокиселина у В региону одређују специфичност везивања антигена антитела.Због стално променљивих типова и редоследа аминокиселина у В региону, могу се формирати многе врсте антитела са различитим специфичностима везивања антигена.В региони Л ланца и Х ланца називају се ВЛ и ВХ, респективно.У ВЛ и ВХ, састав аминокиселина и секвенца неких локалних региона имају већи степен варијације.Ови региони се називају хиперваријабилни региони (ХВР).Састав аминокиселина и распоред делова који нису ХВР у В региону су релативно конзервативни, што се назива оквирни регион.Постоје три хиперваријабилна региона у ВЛ, обично лоцирана на аминокиселинским остацима 24 до 34 и 89 до 97 респективно.Три ХВР-а ВЛ и ВХ називају се ХВР1, ХВР2 и ХВР3, респективно.Истраживањем и анализом дифракције рендгенских кристала доказано је да је хиперваријабилни регион заиста место везивања антигена антитела, па се назива регион који одређује комплементарност (ЦДР).ХВР1, ХВР2 и ХВР3 ВЛ и ВХ могу се назвати ЦДР1, ЦДР2 и ЦДР3 респективно.Генерално, ЦДР3 има виши степен хиперваријабилности.Хиперваријабилни регион је такође главна локација где постоје идиотипске детерминанте Иг молекула.У већини случајева, Х ланац игра важнију улогу у везивању за антиген.
Константни регион (Ц регион)налази се на 3/4 или 4/5 (отприлике од амино киселине 119 до Ц терминала) Х ланца близу Ц краја и 1/2 (садржи око 105 аминокиселинских остатака) близу Ц краја Л ланца.Сваки функционални регион Х ланца садржи око 110 аминокиселинских остатака и садржи пептидни прстен састављен од 50-60 аминокиселинских остатака повезаних дисулфидним везама.Састав и распоред аминокиселина овог региона су релативно константни у истом животињском Иг ланцу изотипа Л и истом ланцу типа Х.Исто, може се само специфично везати за одговарајући антиген, али је структура његовог Ц региона иста, односно има исту антигеност.Коњско анти-хумано ИгГ секундарно антитело (или анти-антитело) може се комбиновати са два А комбинација антитела (ИгГ) против различитих егзотоксина се јавља.Ово је важна основа за припрему секундарних антитела и примену флуоресцеина, изотопа, ензима и других обележених антитела.
 
 
Сродни производи:
Целл Дирецт РТ-кПЦР комплет