Целл Дирецт РТ кПЦР комплет—СИБР ГРЕЕН И комплети за кРТ-ПЦР у једном кораку спремни за директну лизу ћелија
Описи
Овај комплет користи јединствени систем пуфера за лизу који може брзо да ослободи РНК из узорака култивисаних ћелија за РТ-кПЦР реакције, чиме се елиминише дуготрајан и напоран процес пречишћавања РНК.РНК шаблон се може добити за само 7 минута.5×Директна РТ мешавина и 2×Директни кПЦР Мик-СИБР реагенси који се налазе у комплету могу брзо и ефикасно да добију квантитативне ПЦР резултате у реалном времену.
5×Директна РТ мешавина и 2×Директни кПЦР Мик-СИБР има јаку толеранцију на инхибиторе, а лизат узорака се може користити као шаблон за РТ-кПЦР директно.Овај комплет садржи јединствену РНА високог афинитета Форегене реверзну транскриптазу и Хот Д-Так ДНК полимеразу, дНТП, МгЦл2, реакциони пуфер, ПЦР оптимизатор и стабилизатор.
Спецификације
200×20μл Ркнс, 1000×20μл Ркнс
Компоненте комплета
| И део | Буффер ЦЛ |
| Фореген Протеасе Плус ИИ | |
| Буффер СТ | |
| ИИ део | ДНК Ерасер |
| 5× Дирецт РТ Мик | |
| 2× Дирецт кПЦР Мик-СИБР | |
| 50× РОКС референтна боја | |
| ддХ2О без РНазе | |
| Упутства | |
Карактеристике и предности
■Једноставно и ефикасно: са Целл Дирецт РТ технологијом, узорци РНК се могу добити за само 7 минута.
■ Потреба за узорком је мала, може се тестирати само 10 ћелија.
■ Висока пропусност: може брзо да открије РНК у ћелијама култивисаним у плочама са 384, 96, 24, 12, 6 јажица.
■ ДНК Ерасер може брзо уклонити ослобођене геноме, значајно смањити утицај на накнадне експерименталне резултате.
■ Оптимизовани РТ и кПЦР систем чини двостепену РТ-ПЦР реверзну транскрипцију ефикаснијом, а ПЦР специфичнијим и отпорнијим на инхибиторе РТ-кПЦР реакције.
Апликација комплета
Обим примене: култивисане ћелије.
- РНК ослобођена лизом узорка: применљиво само на РТ-кПЦР шаблон овог комплета.
- Комплет се може користити у следеће сврхе: анализа експресије гена, верификација ефекта утишавања гена посредованог сиРНА, скрининг лекова итд.
Дијаграм
Складиштење и рок трајања
Део И овог комплета треба чувати на 4℃;Део ИИ треба чувати на -20℃.
Форегене Протеасе Плус ИИ треба чувати на 4℃, не замрзавајте на -20 ℃.
Реагенс 2×Директни кПЦР Мик-СИБР треба чувати на -20℃у мраку;ако се често користи, може се чувати и на 4℃ за краткотрајно складиштење (искористите у року од 10 дана).
Принципи дизајна ПЦР прајмера у реалном времену
Форвард Пример и Реверсе Пример
За ПЦР у реалном времену, дизајн прајмера је веома важан.Прајмери се односе на специфичност и ефикасност ПЦР амплификације и могу се дизајнирати на основу следећих принципа:
Дужина прајмера: 18-30бп.
ГЦ садржај: 40-60%.
Тм вредност: Софтвер за дизајн прајмера, као што је Пример 5, може дати Тм вредност прајмера.Вредности Тм узводних и низводних прајмера треба да буду што је могуће ближе.Може се користити и формула за израчунавање Тм: Тм = 4 °Ц (Г + Ц) + 2 °Ц (А + Т).Приликом обављања ПЦР-а, температура испод Тм вредности прајмера од 5 °Ц се генерално бира као температура жарења (одговарајуће повећање температуре жарења може повећати специфичност ПЦР реакције).
Прајмери и ПЦР производи:
Дужина производа ПЦР амплификације прајмера је пожељно 100-150бп.
Дизајн прајмера у секундарној структурној области шаблона треба избегавати што је више могуће.
Избегавајте формирање 2 или више комплементарних база између 3′ крајева узводног и низводног прајмера.
Прајмер 3′ терминална база не може бити присутна са 3 додатна узастопна Г или Ц.
Сами прајмери не могу имати комплементарне структуре, иначе ће се формирати структура укоснице која утиче на ПЦР амплификацију.
АТЦГ треба да буде распоређен што је могуће равномерније у секвенци прајмера, а 3′ терминалну базу треба избегавати као Т.
Додатак 1: Целл Дирецт РТ-кПЦР Кит компонентни пакет додатака
1.Раствор за лизу ћелија
|
| |||
| Компоненте комплета (систем за лизу са 24 бунара / бунар) | ДРТ-01011-А1 | ДРТ-01011-А2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ПартИ | Буффер ЦЛ | 20 мл | 100 мл |
| Фореген Протеасе Плус ИИ | 400 μл | 1 мл × 2 | |
| Буффер СТ | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ПартИИ | ДНК Ерасер | 400 μл | 1 мл × 2 |
2.РТ Мик
|
| |
| Компоненте комплета (20 μл реакциони систем) | ДРТ-01011-Б1 |
| 200 Т | |
| 5× Дирецт РТ Мик | 800 μл |
| ддХ без РНазе2O | 1,7 мл × 2 |
|
| ||
| Компоненте комплета (20 μл реакциони систем) | ДРТ-01011-Ц1 | ДРТ-01011-Ц2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Дирецт кПЦР Мик-СИБР | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 50× РОКС референтна боја | 40 μл | 200 μл |
| ддХ без РНазе2O | 1,7 мл | 10 мл |
Упутства за употребу:
