ФАК је заКомплет за изолацију укупне РНК животиња

Следећа анализа проблема на које можете наићиекстракција РНК животињског ткива/ћелије will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

РНК се не екстрахује или је принос РНК низак

Често постоји низ фактора који утичу на ефикасност опоравка, као што су: садржај РНК узорка ткива, начин рада, запремина елуирања итд.

1. Ледено купатило или криогено (4 °Ц) центрифугирање је извршено током рада.

Препорука: Радити на собној температури (15-25°Ц) током целог процеса, не купати у леденом купатилу и центрифугирати на ниским температурама.

2. Неправилно чување узорка или прекомерно време складиштења узорка.

Препорука: Чувати узорке на -80 °Ц или замрзнути у течном азоту и избегавати поновну употребу замрзавања-одмрзавања;покушајте да користите свеже ткиво или култивисане ћелије за екстракцију РНК.

3. Недовољна лиза узорка.

Препорука: Када хомогенизујете ткиво, уверите се да је ткиво довољно хомогенизовано и да су ћелије ткива довољно подељене да објасни ослобађање РНК.

4. Елуент није додат правилно.

Препорука: Потврдите да је ддХ без РНасе₂О се додаје у капима у средину мембране колоне за пречишћавање.

5. Тачна запремина апсолутног етанола није додата пуферу РЛ2 или пуферу РВ2.

Препорука: Следите упутства, додајте тачну запремину апсолутног етанола у пуфер РЛ2 и пуфер РВ2 и добро промешајте пре употребе комплета.

6. Дозирање узорка ткива није прикладно.

Препорука: Користите 10-20 мг ткива или (1-5) × 10⁶ћелије по 500 μл пуфера РЛ1, јер прекомерна употреба ткива може довести до смањене екстракције РНК.

7. Неправилна запремина елуирања или непотпуно елуирање.

Препорука: Запремина елуирања колоне за пречишћавање је 50-200 μл;ако ефекат елуирања није задовољавајући, препоручује се да се продужи време постављања на собној температури након додавања претходно загрејаног ддХ без РНасе₂О, нпр. 5-10 мин.

8. Колона за пречишћавање има остатак етанола након прања пуфером РВ2.

Препорука: Ако постоји остатак етанола након прања пуфера РВ2, центрифугирања празне епрувете у трајању од 1 мин, време за операцију центрифугирања празне епрувете може се повећати на 2 мин, или се колона за пречишћавање може ставити на собну температуру на 5 минута да би се адекватно уклонио преостали етанол.

Пречишћена РНК се разграђује

Квалитет пречишћене РНК је повезан са факторима као што су очување узорка, контаминација РНК-азом и манипулација, итд.

1. Узорци ткива се не чувају на време.

Препорука: Ако се узорци ткива или ћелије не користе благовремено након сакупљања, одмах криоконзервирати на -80 °Ц или течним азотом.Да бисте издвојили РНК, користите ново узет узорак ткива или ћелије кад год је то могуће.

2. Поновљено замрзавање-одмрзавање узорака ткива.

Препорука: Приликом складиштења узорака ткива, најбоље је да их исечете на мале комаде ради очувања, а приликом употребе уклоните један од комада како бисте избегли поновно замрзавање-одмрзавање узорка и разградњу РНК.

3. РНасе се уводи или не носи рукавице за једнократну употребу, маске и сл. током операције.

Препорука: Експерименте екстракције РНК најбоље је изводити у одвојеним просторијама за манипулацију РНК и табела се чисти пре експеримента.

Носите рукавице и маске за једнократну употребу током експеримента како бисте минимизирали деградацију РНК узроковану увођењем РНКазе.

4. Реагенси су контаминирани РНазом током употребе.

Препорука: Замените новим комплетом за изолацију укупне РНК животиња за повезане експерименте.

5. Центрифугалне епрувете, врхови итд. који се користе у РНК манипулацији су контаминирани РНазом.

Препорука: Потврдите да су центрифугалне епрувете, врхови, пипете, итд. који се користе за екстракцију РНК, све без РНКазе.

Пречишћена добијена РНК утиче на низводне експерименте

РНК пречишћена колоном за пречишћавање, ако је јони соли, садржај протеина превелик, то ће утицати на низводни експеримент, као што су: реверзна транскрипција, Нортхерн Блот ет ал.

1. РНК која је елуирана има остатке јона соли.

Препорука: Потврдите да је тачна запремина етанола додата пуферу РВ2 и извршите 2 испирања колоне за пречишћавање при центрифугалној брзини која је назначена за рад;ако има остатака јона соли, оставите колону за пречишћавање у пуферу РВ2 5 минута на собној температури и извршите центрифугирање да бисте максимално уклонили контаминацију соли.

2. Остатак етанола у елуираној РНК.

Препорука: Потврдите да након испирања пуфера РВ2 извршите операцију центрифугирања празне епрувете при брзини центрифугирања која је назначена за рад, повећајте време операције центрифугирања празне епрувете на 2 минута ако још има остатака етанола или оставите на собној температури 5 минута након центрифугирања празне епрувете да бисте максимизирали уклањање остатка.

Изолација типова узорака нулцеинске киселине

Комплети за изолацију РНК компаније Форегене могу да добију потпуну изолацију/екстракцију РНК из следећих извора узорака: животињско ткиво, биљка, ћелије, вирус, крв, итд.

Како да чувам комплет

Чување на собној температури 24 месеца.