Комплет за изолацију укупне РНК за животиње Комплети за екстракцију и пречишћавање укупне РНК за животињска ткива и ћелије
Опис комплета:
Брзо и ефикасно издвајање укупне РНК високе чистоће и високог квалитета из различитих животињских ткива.
Нема потребе да бринете о деградацији РНК.Цео систем је без РНасе
Ефикасно уклоните ДНК помоћу колоне за чишћење ДНК
Уклоните ДНК без додавања ДНазе
Једноставно – све операције се обављају на собној температури
Брзо — операција се може завршити за 30 минута
Безбедан - не користи се органски реагенс
Висока чистоћа—ОД260/280≈1,8-2,1
Описи комплета
50 припрема, 200 припрема
Овај комплет користиспин колона и формулакоју је развила наша компанија, која може издвојити укупну РНК високе чистоће и високог квалитета из различитих животињских ткива са високом ефикасношћу.Обезбеђује ефикасну колону за чишћење ДНК, која може лако да одвоји и адсорбује геномску ДНК из супернатанта и лизата ткива, једноставно и штеди време;Колона само за РНК може ефикасно да веже РНК и може се истовремено обрадити са јединственом формулом Много узорака.
Цео систем је без РНазе, тако да се екстрахована РНК не разграђује;Пуфер РВ1, Пуфер РВ2 систем за прање пуфера, тако да добијена РНК не садржи загађење протеина, ДНК, јона и органских једињења.
Компоненте комплета
| Комплет за изолацију укупне РНК животиња | ||
| Компоненте комплета | РЕ-03011 | РЕ-03014 |
| 50 Т | 200 Т | |
| Бафер РЛ1* | 25мл | 100мл |
| Буффер РЛ2 | 15мл | 60мл |
| Бафер РВ1* | 25мл | 100мл |
| Буффер РВ2 | 24мл | 96мл |
| ддХ2О без РНазе | 10мл | 40мл |
| Колона само за РНК | 50 | 200 |
| Колона за чишћење ДНК | 50 | 200 |
| Упутства за употребу | 1 комад | 1 комад |
Информације о производу
| Формат | Спин цолумн | Компонента пречишћавања | Фореген колона, реагенс |
| Флук | 1-24 узорка | Време за припрему | ~30 мин (24 узорка) |
| Центрифуга | Столна центрифуга | Пиролизно одвајање | Центрифугална сепарација |
| Узорак | Животињско ткиво;мобилни | Количина узорака | Ткиво:10-20 мг;Ћелија:(1-5)×106 |
| Волумен елуције | 50-200 μЛ | Максимална запремина утовара | 850 μЛ |
Карактеристике и предности
■ Нема потребе да бринете о деградацији РНК;цео систем је без РНасе
■ Ефикасно уклоните ДНК користећи колону за чишћење ДНК
■ Уклоните ДНК без додавања ДНазе
■ Једноставне-све операције се обављају на собној температури
■ Брза операција се може завршити за 30 минута
■ Безбедан - није потребан органски реагенс
■ Висока чистоћа -ОД260/280≈1,8-2,1
Апликација комплета
Погодан је за екстракцију и пречишћавање укупне РНК из разних свежих или смрзнутих животињских ткива или култивисаних ћелија.
Параметри производа
■ Ниже примене: синтеза првог ланца цДНК, РТ-ПЦР, молекуларно клонирање, Нортхерн блот итд.
■ Узорци: животињска ткива, култивисане ћелије
■ Дозирање: ткива 10-20 мг, ћелије (2-5)×106
■ Максимални капацитет везивања ДНК колоне за пречишћавање: 80 μг
■ Запремина елуирања: 50-200 μл
Дијаграм
Комплет за изолацију укупне РНК животиња третиран 20 мг
Свеже узорке миша, узмите 5% пречишћене укупне РНК 1% агар
Гликогел електрофореза
1: Слезина 2: Бубрег
3: Јетра 4: Срце
Складиштење и рок трајања
Комплет се може чувати 24 месеца на собној температури (15–25 ℃) или 2–8 ℃ дуже време.Пуфер РЛ1 се може чувати на 4 ℃ 1 месец након додавања β-меркаптоетанола (опционо).
Цитирани чланци
1.ИФ:18.808:Зхенг, К., Кин, Ф., Луо, Р., ет ал.мРНА напуњене липидима сличне наночестице за уређивање базе јетре путем оптимизације централног композитног дизајна.Адв.Фунцт.Матер.2021, 31, 2011068.дои:10.1002/адфм.202011068.
2.ИФ:18.187:Хе Кс, Хонг В, Ианг Ј, ет ал.Спонтана апоптоза ћелија у терапијском препарату матичних ћелија испољава имуномодулаторно дејство ослобађањем фосфатидилсерина.Сигнал Трансдуцт Таргет Тхер.2021. јул 14;6(1):270.дои: 10.1038/с41392-021-00688-з.
3.ИФ:17,97: Даи З, Лиу Х, Лиао Ј, ет ал.Модификација тРНК Н7-метилгуанозина побољшава онкогену транслацију мРНК и промовише прогресију интрахепатичног холангиокарцинома.Мол Целл.29. јул 2021.: С1097-2765(21)00555-4.дои: 10.1016/ј.молцел.2021.07.003.
4.ИФ:9.225: Цао Кс, Сху И, Цхен И, ет ал.Меттл14 посредована м6А модификација олакшава регенерацију јетре одржавањем хомеостазе ендоплазматског ретикулума.Целл Мол Гастроентерол Хепатол.2021;12(2):633-651.дои: 10.1016/ј.јцмгх.2021.04.001.
Комплети за изолацију РНК за други извори узоракасу доступни:
Ћелија, биљка, вирус, крв итд.
РНК се не екстрахује или је принос РНК низак
Често постоји низ фактора који утичу на ефикасност опоравка, као што су: садржај РНК узорка ткива, начин рада, запремина елуирања итд.
1. Ледено купатило или криогено (4 °Ц) центрифугирање је извршено током рада.
Препорука: Радити на собној температури (15-25°Ц) током целог процеса, не купати у леденом купатилу и центрифугирати на ниским температурама.
2. Неправилно чување узорка или прекомерно време складиштења узорка.
Препорука: Чувати узорке на -80 °Ц или замрзнути у течном азоту и избегавати поновну употребу замрзавања-одмрзавања;покушајте да користите свеже ткиво или култивисане ћелије за екстракцију РНК.
3. Недовољна лиза узорка.
Препорука: Када хомогенизујете ткиво, уверите се да је ткиво довољно хомогенизовано и да су ћелије ткива довољно подељене да објасни ослобађање РНК.
4. Елуент није додат правилно.
Препорука: Потврдите да је ддХ без РНасе2О се додаје у капима у средину мембране колоне за пречишћавање.
5. Тачна запремина апсолутног етанола није додата пуферу РЛ2 или пуферу РВ2.
Препорука: Следите упутства, додајте тачну запремину апсолутног етанола у пуфер РЛ2 и пуфер РВ2 и добро промешајте пре употребе комплета.
6. Дозирање узорка ткива није прикладно.
Препорука: Користите 10-20 мг ткива или (1-5) × 106ћелије по 500 μл пуфера РЛ1, јер прекомерна употреба ткива може довести до смањене екстракције РНК.
7. Неправилна запремина елуирања или непотпуно елуирање.
Препорука: Запремина елуирања колоне за пречишћавање је 50-200 μл;ако ефекат елуирања није задовољавајући, препоручује се да се продужи време постављања на собној температури након додавања претходно загрејаног ддХ без РНасе2О, нпр. 5-10 мин.
8. Колона за пречишћавање има остатак етанола након прања пуфером РВ2.
Препорука: Ако постоји остатак етанола након прања пуфера РВ2, центрифугирања празне епрувете у трајању од 1 мин, време за операцију центрифугирања празне епрувете може се повећати на 2 мин, или се колона за пречишћавање може ставити на собну температуру на 5 минута да би се адекватно уклонио преостали етанол.
Пречишћена РНК се разграђује
Квалитет пречишћене РНК је повезан са факторима као што су очување узорка, контаминација РНК-азом и манипулација, итд.
1. Узорци ткива се не чувају на време.
Препорука: Ако се узорци ткива или ћелије не користе благовремено након сакупљања, одмах криоконзервирати на -80 °Ц или течним азотом.Да бисте издвојили РНК, користите ново узет узорак ткива или ћелије кад год је то могуће.
2. Поновљено замрзавање-одмрзавање узорака ткива.
Препорука: Приликом складиштења узорака ткива, најбоље је да их исечете на мале комаде ради очувања, а приликом употребе уклоните један од комада како бисте избегли поновно замрзавање-одмрзавање узорка и разградњу РНК.
3. РНасе се уводи или не носи рукавице за једнократну употребу, маске и сл. током операције.
Препорука: Експерименте екстракције РНК најбоље је изводити у одвојеним просторијама за манипулацију РНК и табела се чисти пре експеримента.
Носите рукавице и маске за једнократну употребу током експеримента како бисте минимизирали деградацију РНК узроковану увођењем РНКазе.
4. Реагенси су контаминирани РНазом током употребе.
Препорука: Замените новим комплетом за изолацију укупне РНК животиња за повезане експерименте.
5. Центрифугалне епрувете, врхови итд. који се користе у РНК манипулацији су контаминирани РНазом.
Препорука: Потврдите да су центрифугалне епрувете, врхови, пипете, итд. који се користе за екстракцију РНК, све без РНКазе.
Пречишћена добијена РНК утиче на низводне експерименте
РНК пречишћена колоном за пречишћавање, ако је јони соли, садржај протеина превелик, то ће утицати на низводни експеримент, као што су: реверзна транскрипција, Нортхерн Блот ет ал.
1. РНК која је елуирана има остатке јона соли.
Препорука: Потврдите да је тачна запремина етанола додата пуферу РВ2 и извршите 2 испирања колоне за пречишћавање при центрифугалној брзини која је назначена за рад;ако има остатака јона соли, оставите колону за пречишћавање у пуферу РВ2 5 минута на собној температури и извршите центрифугирање да бисте максимално уклонили контаминацију соли.
2. Остатак етанола у елуираној РНК.
Препорука: Потврдите да након испирања пуфера РВ2 извршите операцију центрифугирања празне епрувете при брзини центрифугирања која је назначена за рад, повећајте време операције центрифугирања празне епрувете на 2 минута ако још има остатака етанола или оставите на собној температури 5 минута након центрифугирања празне епрувете да бисте максимизирали уклањање остатка.
