Били смо искусни произвођач.Освајање већине у кључним сертификатима на свом тржишту за кинеску сонду високе осетљивости у једном кораку са великим попустом Рт-КпцрКомплет В2, квалитет је фабрички живот, фокусирање на потражњу купаца је извор опстанка и развоја компаније, придржавамо се поштења и доброг радног става, радујемо се вашем доласку!
Били смо искусни произвођач.Освајање већине у кључним сертификатима свог тржишта заКина Так ДНК полимераза, Кпцр, Наша компанија обећава: разумне цене, кратко време производње и задовољавајућу постпродајну услугу, такође вас поздрављамо да посетите нашу фабрику у било које време када желите.Желимо да сада имамо пријатан и дугорочни посао заједно!!!

Описи

Овај комплет користи јединствени систем пуфера за лизу који може брзо да ослободи РНК из узорака култивисаних ћелија за РТ-кПЦР реакције, чиме се елиминише дуготрајан и напоран процес пречишћавања РНК.РНК шаблон се може добити за само 7 минута.5×Дирецт РТ Мик и 2×Дирецт кПЦР Мик-СИБР реагенси који се налазе у комплету могу брзо и ефикасно добити квантитативне ПЦР резултате у реалном времену.

5×Дирецт РТ Мик и 2×Дирецт кПЦР Мик-СИБР имају јаку толеранцију на инхибиторе, а лизат узорака се може користити као шаблон за РТ-кПЦР директно.Овај комплет садржи јединствену РНА високог афинитета Форегене реверзну транскриптазу и Хот Д-Так ДНК полимеразу, дНТП, МгЦл₂, реакциони пуфер, ПЦР оптимизатор и стабилизатор.

Спецификације

200×20μл Ркнс, 1000×20μл Ркнс

Компоненте комплета

Карактеристике и предности

■ Једноставно и ефикасно: са Целл Дирецт РТ технологијом, узорци РНК се могу добити за само 7 минута.

■ Потреба за узорком је мала, може се тестирати само 10 ћелија.

■ Висока пропусност: може брзо да открије РНК у ћелијама култивисаним у плочама са 384, 96, 24, 12, 6 јажица.

■ ДНК Ерасер може брзо уклонити ослобођене геноме, значајно смањити утицај на накнадне експерименталне резултате.

■ Оптимизовани РТ и кПЦР систем чини двостепену РТ-ПЦР реверзну транскрипцију ефикаснијом, а ПЦР специфичнијим и отпорнијим на инхибиторе РТ-кПЦР реакције.

Апликација комплета

Обим примене: култивисане ћелије.

- РНК ослобођена лизом узорка: применљиво само на РТ-кПЦР шаблон овог комплета.

- Комплет се може користити у следеће сврхе: анализа експресије гена, верификација ефекта утишавања гена посредованог сиРНА, скрининг лекова итд.

Дијаграм

Складиштење и рок трајања

Део И овог комплета треба чувати на 4℃;Део ИИ треба чувати на -20℃.

Форегене Протеасе Плус ИИ треба чувати на 4℃, не замрзавати на -20℃.

Реагенс 2×Дирецт кПЦР Мик-СИБР треба чувати на -20℃ у мраку;ако се често користи, може се чувати и на 4℃ за краткотрајно складиштење (искористи се у року од 10 дана). Ми смо искусни произвођач.Освајање већине у кључним сертификатима на свом тржишту за велико снижене кинеске високоосетљиве једностепене сонде Рт-Кпцр Кит В2, квалитет је фабрички живот, фокус на потражњу купаца је извор опстанка и развоја компаније, придржавамо се поштења и доброг радног односа, радујемо се вашем доласку!
Велико снижењеКина Так ДНК полимераза, Кпцр, Наша компанија обећава: разумне цене, кратко време производње и задовољавајућу услугу након продаје, такође вам желимо добродошлицу да посетите нашу фабрику у било које време.Желимо да сада имамо пријатан и дугорочни посао заједно!!!

QuickEасиTM Cell Direct RT-qПЦР Kit -Такмan

Кат.бр.ДРТ-01021/01022

За ћелијски директни РТ-кПЦР коришћењем ≤ 1000.000 ћелија

Представљање производа

Овај производ користи јединствени пуфер систем за лизу за брзо ослобађање РНК из узорака култивисаних ћелија за РТ-кПЦР реакције, елиминишући дуготрајан и напоран процес пречишћавања РНК и само 7 минута за добијање потребног РНК шаблона, уз 5× директну РТ мешавину, 2× директну кПЦР мешавину, 2× директну кПЦР мешавину-Такман који се добија брзо и ефикасно помоћу комплета.

5× Дирецт РТ Мик и 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман имају јаку толеранцију на инхибиторе и могу да изврше ефикасан преокрет и специфично појачање користећи лизат узорка који се мери као шаблон.Реагенс садржи Форегене реверзну транскриптазу, врућу Д-Так ДНК полимеразу, дНТП, МгЦл₂, Реацтион Буффер, ПЦР Оптимизер и Стабилизер, који се може користити са пуфером за лизу за брзо и лако откривање узорака, а има карактеристике високе осетљивости, специфичности и стабилности.

Карактеристике производа

Једноставна, ефикасна Целл Дирецт РТ технологија којој је потребно само 7 минута за добијање узорака РНК.

Захтеви за узорке су мали и најмање 10 култивисаних ћелија се може користити за експериментисање.

Висока пропусност за брзу аквизицију РНК у култивисаним ћелијама као што су плоче са 384, 96, 24, 12 и 6 јажица.

ДНК Ерасер је у стању да брзо уклони ослобођене геноме, значајно смањујући утицај на накнадне експерименталне резултате.

Оптимизовани РТ и кПЦР системи омогућавају РТ-ПЦР у два корака са ефикаснијом реверзном транскрипцијом, специфичношћу и јачом толеранцијом на инхибиторе РТ-кПЦР реакције.

Апликација комплета

Обим примене: Култивисане ћелије.

РНК интерпретирана лизом узорка: користи се само као РТ-кПЦР шаблон у два корака.

Комплети се могу користити у следеће сврхе: анализа регулаторне експресије гена, тестирање алела, скрининг лекова итд.

Ограничења комплета

Амплификовани фрагменти ≤ 300 бп.

Комплети се користе за свеже културе ћелија.

Контрола квалитета производа

Према ФОРЕГЕНЕ-овом систему управљања тоталним квалитетом, свака серија комплета Целл Дирецт РТ-кПЦР серије је ригорозно тестирана више пута како би се осигурала поузданост и стабилност квалитета сваке серије комплета.

Садржај комплета

*:Лиза ћелија, 5×Дирецт РТ Мик, 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман се може купити засебно, детаљи су дати у Додатку 1 (СТРАНИЦА 13).

Услови складиштења

1. Услови испоруке

Цео процес транспорта кутије за лед на ниским температурама, како би се осигурало да је комплет у стању <4 °Ц.

2. Услови складиштења

Чувати део И на 4°Ц и део ИИ на -20°Ц.

Форегене Протеасе Плус ИИ треба чувати на 4°Ц, а не замрзавати на -20°Ц.

Реагенс 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман се чува на -20°Ц, или на 4°Ц за краткотрајну употребу ако се користи често (у року од 10 дана).

Информације о компонентама комплета

Пуфер ЦЛ: Обезбеђује окружење потребно за реакције лизе ћелија.

Пуфер СТ: Прекида активну супстанцу у лизату да би се избегли ефекти на накнадну РТ.

ДНК Ерасер: ДНК уклањање, ефекат уклањања генома у наредним експериментима.

5× Директна РТ мешавина: Садржи Форегене реверзну транскриптазу високог афинитета за РНК, инхибитор РНазе, дНТП, стабилизаторе, појачиваче, оптимизаторе и прајмере за реверзну транскрипцију за оптимално поравнање (Рандом Пример, Олиго(дТ)₁₈Пример).

Форегене Протеасе Плус ИИ: У контексту пуфера за лизу, ћелије се лизирају да би се ослободиле нуклеинске киселине.

2× Директна кПЦР Мик-Такман: ​​Овај реагенс садржи Хот Д-Так ДНК полимеразу, дНТПс, МгЦл₂, реакциони пуфер, ПЦР оптимизатор и стабилизатор.

20× РОКС референтна боја: Генерално се користи на инструментима за ПЦР умножавање у реалном времену АБИ, Стратагене и других компанија, користи се за подешавање разлике између ПЦР епрувета и епрувета узрокованих грешкама у ПЦР дозирању.Концентрација 20× РОКС референтне боје потребна за различите инструменте је различита, а корисник је може додати према препорученој концентрацији инструмента.

ддХ без РНазе₂О: стерилисана ултра чиста вода без РНазе за РТ-кПЦР реакције у два корака.

Превентивне мере:(Обавезно пажљиво прочитајте мере предострожности пре употребе комплета)

Обратите пажњу на метод рада експеримента како бисте избегли унакрсну контаминацију између узорака.

Обратите пажњу на чистоћу експерименталног окружења и прибора како бисте избегли контаминацију РНасе и деградацију РНК.

Узмите свеже или добро очуване узорке ћелија и никада не користите поновљене замрзнуто-одмрзнуте узорке ћелија.

5× Дирецт кПЦР Мик, 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман треба да избегава поновљено замрзавање-одмрзавање, у супротном ће утицати на реверзну транскрипцију и ефикасност ПЦР-а.

Препаоброципре него штооперација

Обавезно пажљиво прочитајте упутства пре употребе овог комплета.Целл Дирецт РТ-кПЦР комплет је једноставан, згодан и брз за руковање, а упутства пружају потпуне информације о целом комплету и како га правилно користити.Молимо припремите неопходне експерименталне материјале и опрему пре употребе.

Експериментални материјали и опрема

◆ Ћелије културе.

◆ 1,5 мл или 2 мл, епрувета за центрифугирање без РНазе/Дназе, врх без РНазе/Дназе, стерилна кПЦР епрувета од 0,2 мл.

◆ кПЦР машина, пипета, столна центрифуга (≥13,400×г) (у зависности од експерименталних потреба) итд.

Сигурност

◆ Овај производ је само у сврхе научног истраживања, немојте га користити у фармацеутске, клиничке, прехрамбене и козметичке сврхе.

◆ Када користите хемикалије, носите одговарајућу лабораторијску одећу, рукавице, заштитне наочаре итд.

Операцијаводичи

Системи за лизу ћелија, РТ системи и пакети додатака раствора за кПЦР реакцију могу се купити засебно, за детаље у Додатку 1 (СТ. 13).

Упутство за употребу

О: Отпуштање узорка РНК

1. Ћелије су претходно третиране: испрати плочу ћелијске културе хладним ПБС, затим лизирати ћелије (10-10⁶), 10⁶ од количине ћелија, препоручује се Форегене тхе Целл ан РНА Исолатион Кит тхе Тотал (ДЕ-03111) или Анимал Тотал РНА Исолатион Кит (ДЕ-03011) за екстракцију и пречишћавање РНК.

1.1.Адхерентне ћелије (плоча са 24 отвора као пример)

1.1.1.Одредите број ћелија у сваком бунарчићу, одредите да је број ћелија 1 × 10⁵, и користите пипету да уклоните медијум за културу из посуде за културу.

1.1.2.Додајте 200 μл претходно охлађеног 1 × ПБС у сваки бунар.Немојте више пута пипетирати и уклонити ПБС из бунара.Нагните плочу и уклоните што је више могуће ПБС.Пређите на корак 2.

1.1.3.Различита посуда за ћелијску културу или табела са референтним бројем 1-1 у посуду за ћелијску културу је додата претходно охлађена 1 × ПБС за испирање ћелија.

Табела 1-1: Дозирање ПБС-а за различит број ћелија

Белешка:Да би се обезбедило чврсто приањање ћелија,велики број губитака ћелија избегнут при прању .

1.2.Суспензиране ћелије или адхерентне ћелије узгајане у непорозним плочама

1.2.1.Адхерентне ћелије култивисане у плочама без више бунара (ћелије суспензије почињу од следећег корака 1.2.2), сакупите и одвојите ћелије у складу са уобичајеним методом сакупљања ћелија и ставите их у плочу за културу или епрувету за центрифугирање;ако се користи трипсинизација, потребно је центрифугирање да се сакупе ћелије и да се уклони резидуални трипсин, додати ПБС ресуспендоване ћелије у појединачне ћелије да би се ћелије распршиле.

1.2.2.Након избројаног броја ћелија, аликвотиране ћелије 1 × 10⁵ једну у епрувете за центрифугирање, сакупите ћелије центрифугирањем на 1000 × г током 10 мин.

1.2.3.Додајте 200 μл ПБС у епрувету за центрифугирање, немојте пипетирати више пута и директно аспирирајте ПБС.пређите на корак 2. (Ако је тешко преципитирати и ћелије су поново суспендоване, може се извршити центрифугирање 1000×г 10 минута након одбацивања супернатанта, ћелијска пелета прелази на корак 2)

2. Лиза ћелије: Уклоните пуфер ЦЛ, чија је температура изједначена са собном температуром, ДНК Ерасер и Форегене Протеасе Плус ИИ, према следећој табели 1-2 припремљени систем за лизу: (Ратвор за лизу је спреман за употребу).

Табела 1-2: цепање припрема система (Напомена: у припреми на леду)

3. (плоча са 24 бунарчића као пример) Одпипетирајте 200 μл мастер мешавине ћелијске лизе у сваки бунар, више пута дувајте 5-10 пута, инкубирајте на собној температури (20-25 ℃) 5 мин.

Белешка:Да бисте избегли стварање мехурића, молимо када је скала пипете за пипетирање подешена на 200 μл или мање.Ћелије могу изгледати замућене након лизе, што је нормално.

4. (плоча са 24 бунарчића као пример) се додаје у течност од 20 μл пуфера СТ (различити системи за лизу Пуфер СТ је додат у количини приказаној у табели 1-3), поновљено пипетирање 5-10 пута, на собној температури (20-25 ℃) инкубирано је 2 мин.

Белешка:Врх пипете се налазио испод површине, обезбеђујући да је лизат додат,да бисте избегли стварање мехурића, молимо када је скала пипете за пипетирање подешена на 200 μл или мање.

Табела 1-3:Адд Буффер СТ

5. Лизат се користи за накнадне РТ-кПЦР експерименте.Ако се наредни експерименти не могу извести на време, држите га на леду не дуже од 2 сата и чувајте на -20 ℃ или -80 ℃ (не дуже од три месеца).

Б: Припрема РТ система

1.Извадите 5 × Дирецт РТ Мик и ставите је на ледено купатило, оставите да се природно растопи и лагано промешајте за каснију употребу;извадите ддХ2О без РНазе и истопите га и ставите у ледено купатило за каснију употребу.Припремите реакциони систем на леду према табели 2-1 у наставку.

Табела 2-1: Припрема РТ реакционог система

2.Након завршетка формулације система, лагано промешати и кратко центрифугирати у следећој табели 2 -2 реакциони услови РТ реакција.

Табела 2-2: Подешавање услова РТ реакције

3. Након завршетка реакције, производ реакције је стављен директно на лед за кПЦР, ставите дуготрајно чување -20 ℃ или -80 ℃.

Напомена: Због употребе непречишћеног шаблона, бели преципитати се могу појавити у производу реверзне транскрипције.Ово је нормална појава.Супернатант одмах центрифугирајте за следеће експерименте.

Добијени РТ реакциони раствор се додаје у следећи корак ПЦР реакционих система у реалном времену, препоручује се додавање количина у распону од 10-30% реакционог система.

Ц: припрема кПЦР реакционог система

1. Одговарајућа количина Б припремљена у кораку цДНК шаблона према следећој табели 3-1 за припрему реакционог система.

Напомена: Количина цДНК шаблона чини 10-30% кПЦР система.На пример, у кПЦР систему од 20 μл додајте 2-6 μл пуфера за лизу, али не више од 6 μл.

2. Оптимизација добрих кПЦР услова (температура жарења, итд.) за кПЦР реакцију (услови реакције дати у табели 3-2).

Напомена: Покушајте да користите оптимизоване услове за кПЦР реакције да бисте добили боље резултате.

Табела 3-1: Припрема ПЦР реакционог система

1*: Концентрација прајмера се може подесити у опсегу од 50-900 нМ када су перформансе реакције прајмера слабе.

Напомена: кПЦР систем се може подесити према експерименталним потребама и моделу циклуса флуоресценције.За кПЦР у 50μл систему, подесите дозу реагенса пропорционално према 20μл систем.

2*: Изаберите одговарајућу коначну концентрацију РОКС референтне боје према флуоресцентном квантитативном термалном циклусу.Најприкладније концентрације РОКС референтне боје за уобичајене квантитативне циклусе флуоресценције приказане су у табели испод:

Табела 3-2: Дати су услови кПЦР реакције

Напомена: Да би се добио најбољи кПЦР ефекат, градијент ПЦР се може користити за оптимизацију реакционих услова за различите шаблоне и различите прајмере.Услови ПЦР реакције варирају у зависности од флуоресцентног анализатора, шаблона, прајмера итд. У специфичној операцији, оптимални услови реакције треба да буду дизајнирани у складу са специфичним условима флуоресцентног квантитативног термалног циклуса, типом шаблона, величином фрагмента од интереса, базном секвенцом амплификованог фрагмента и садржајем ГЦ и дужином прајмера, укључујући температуру жарења, време реакције итд.

Принципи дизајна ПЦР прајмера у реалном времену

Форвард Пример и Реверсе Пример

За ПЦР у реалном времену, дизајн прајмера је веома важан.Прајмери ​​се односе на специфичност и ефикасност ПЦР амплификације и могу се дизајнирати на основу следећих принципа:

◆ Дужина прајмера: 18-30бп.

◆ Садржај ГЦ: 40-60%.

◆ Тм вредност: Софтвер за дизајн прајмера, као што је Пример 5, може дати Тм вредност прајмера.Вредности Тм узводних и низводних прајмера треба да буду што је могуће ближе.Може се користити и формула за израчунавање Тм: Тм = 4 °Ц (Г + Ц) + 2 °Ц (А + Т).Приликом обављања ПЦР-а, температура испод Тм вредности прајмера од 5 °Ц се генерално бира као температура жарења (одговарајуће повећање температуре жарења може повећати специфичност ПЦР реакције).

◆ Прајмери ​​и ПЦР производи:

◆ Дизајн прајмера ПЦР амплификације дужине производа је пожељно 100-150бп.

◆ Дизајн прајмера у секундарној структурној области шаблона треба избегавати што је више могуће.

◆ Избегавајте формирање 2 или више комплементарних база између 3′ крајева узводног и низводног прајмера.

◆ Прајмер 3′ терминална база не може бити присутна са 3 додатна узастопна Г или Ц.

◆ Сами прајмери ​​не могу имати комплементарне структуре, иначе ће се формирати структура укоснице која утиче на ПЦР амплификацију.

◆ АТЦГ треба да буде распоређен што је могуће равномерније у секвенци прајмера, а 3′ терминалну базу треба избегавати као Т.

слепо црево1:Cелл ДирецтРТ-кПЦР Кит цомпонент пакет додатака

1. Решење за лизу ћелија