Букални брис/ФТА картица Комплет за изолацију ДНК Комплет за екстракцију геномске ДНК или пречишћавање из букалних брисева
Опис комплета:
Брзо пречистите висококвалитетни геномски ДНК из узорака букалног бриса/ФТА картице.
◮Нема контаминације РНасе:Колона само за ДНК коју обезбеђује комплет омогућава уклањање РНК из геномске ДНК без додавања РНазе током експеримента, спречавајући да лабораторија буде контаминирана егзогеном РНКазом.
◮Брзо брзина:Фореген протеаза има већу активност од сличних протеаза и брзо вари узорке ткива;операција је једноставна, а операција екстракције геномске ДНК може се завршити у року од 20-80 минута.
◮Погодно:Центрифугирање се врши на собној температури и нема потребе за нискотемпературним центрифугирањем на 4°Ц или таложењем ДНК етанолом.
◮безбедност:Није потребна екстракција органског реагенса.
◮Висок квалитет:Екстрахована геномска ДНК има велике фрагменте, нема РНК, нема РНКазу и изузетно низак садржај јона, што може да испуни захтеве различитих експеримената.
◮Систем за микро-елуирање:Може повећати концентрацију геномске ДНК, што је погодно за низводно откривање или експеримент.
Опис
Овај комплет пружа ефикасан и брз метод за добијање геномске ДНК високе концентрације из букалних брисева и ФТА картице (крвних мрља).Користећи нашу компанију'Јединствена силика мембрана са спин колоном и формулом која садржи само ДНК, у комбинацији са Форегене протеазом, високо концентрацијска, висококвалитетна геномска ДНК може се екстраховати за 80 минута.Специјално дизајнирана мала колона за пречишћавање везује геномску ДНК, а ДНК се може елуирати са малом количином (15μл) елуциони систем за повећање концентрације добијене геномске ДНК, што је погодно за низводну детекцију или експеримент.Комплет може да обрађује један или више узорака истовремено, а процес пречишћавања не захтева екстракцију органских супстанци као што су фенол, хлороформ и дуготрајно таложење изопропанола или етанола, а операција је једноставна и штеди време.
Спецификације
50 Препс
Компоненте комплета
| Буффер СТ1 |
| Буффер СТ2 |
| Линеарни акриламид |
| Буффер ПВ |
| Буффер ВБ |
| Буффер ЕБ |
| Фореген Протеасе |
| Колона само за ДНК |
| Упутства |
Карактеристике и предности
-Без контаминације РНКазом: Колона само за ДНК коју обезбеђује комплет омогућава уклањање РНК из геномске ДНК без додавања РНазе током експеримента, избегавајући да лабораторија буде контаминирана егзогеном РНКазом.
-Брза брзина: Форегене протеаза има већу активност од сличних протеаза, брзо вари узорке;једноставан рад.
-Погодно: Центрифугирање се изводи на собној температури и нема потребе за нискотемпературним центрифугирањем од 4°Ц или таложењем ДНК етанолом.
-Безбедност: Није потребна екстракција органског реагенса.
-Висок квалитет: Екстрахована геномска ДНК има велике фрагменте, без РНК, без РНКазе и изузетно низак садржај јона, што може испунити захтеве различитих експеримената.
-Микро-елуциони систем: Може повећати концентрацију геномске ДНК, што је погодно за низводно детекцију или експеримент.
Апликација комплета
Погодан је за пречишћавање геномске ДНК из следећих узорака: букални брисеви, ФТА картица (мрље крви).
Складиштење и рок трајања
-Овај комплет може да се чува 12 месеци у сувим условима на собној температури (15-25°Ц);ако је потребно дуже чување може се чувати на 2-8°Ц.
Напомена: Ако се чува на ниској температури, раствор је подложан таложењу.Пре употребе, обавезно ставите раствор у комплет на собну температуру неко време.Ако је потребно, загрејте га у воденом купатилу на 37°Ц 10 минута да се талог раствори, а пре употребе промешајте.
-Форегене Протеасе раствор има јединствену формулу, која је активна када се дуго чува на собној температури (3 месеца);његова активност и стабилност ће бити боља када се чува на 4°Ц, па се препоручује да се чува на 4°Ц, не заборавите да га не чувате на -20°Ц.
Колона за пречишћавање је зачепљена
У овом комплету, у операцији екстракције геномске ДНК, колона за пречишћавање се директно адсорбује на смешу ензимске лизе узорка без корака центрифугирања, а колона за пречишћавање може бити блокирана због непотпуне ензимизације и високог вискозитета узорка.
Следећи могући узроци су следећи:
1. Непотпуна ензимска дигестија узорака ткива.
Препорука: Време обраде узорка Форегене Протеасе може се на одговарајући начин продужити или се супернатант може узети након центрифугирања на 12.000 рпм (~13.400 × г) током 5 минута.
2. Прекомерна употреба узорака ткива или великих ткива.
Препорука: Најбоље је да не прелазите 1 букални брис у узорку;ако је узорак превелик, повећајте дозу пуфера СТ1, фореген протеазе, пуфера СТ2 у складу са тим.
3. Вискозитет узорка је превисок.
Препорука: Узорци се могу на одговарајући начин разблажити са 10 мМ Трис-ХЦл пре екстракције геномске ДНК.
4. Фрагменти крвног картона су усисани.
Препорука: Време пролазног центрифугирања корака 6 геномске екстракције крвних тачака (ФТА картица) може се на одговарајући начин продужити.
Низак принос или без ДНК
Често постоји низ фактора који утичу на принос геномске ДНК, укључујући порекло узорка, услове складиштења узорка, припрему узорка, манипулацију итд.
Геномска ДНК се не може добити током екстракције
Могући узроци су следећи:
1. Неправилно чување узорака или предуго складиштење доводи до деградације геномске ДНК.
Препорука: Оралне брисеве пожељно је узимати свеже, а није препоручљиво користити сачуване брисеве за операције екстракције геномске ДНК;узорци крвних мрља треба да обезбеде да је квалитет квалификован и да време складиштења не би требало да буде предуго.
2. Премала употреба ткива може довести до изостанка екстракције одговарајуће геномске ДНК.
Препорука: Пратите упутства за узимање узорака букалног бриса у упутству за операцију и обришите што је више могуће како би се довољно ћелија могло причврстити на орални брис за екстракцију геномске ДНК;за вађење узорка крвне мрље, површина сечења крвне мрље може се на одговарајући начин повећати.
3. Фореген протеаза је непрописно очувана, што доводи до смањења њене активности или инактивације.
Препорука: Потврдите услове складиштења Форегене протеазе или је замените новом Форегене протеазом за ензимску реакцију.
4. Неправилно очување комплета или време складиштења је предуго, што доводи до квара неких компоненти у комплету.
Препорука: Купите нови комплет за изолацију ДНК букалног бриса за сродне процедуре.
5. Пуфер ВБ не додаје апсолутни етанол.
Препорука: Потврдите да пуфер ВБ додаје тачну запремину апсолутног етанола.
6. Елуент није правилно додат силиконском филму.
Препорука: У средину силиконске мембране додати 65 °Ц претходно загрејане капи елуента и оставити на собној температури 5 мин да би се повећала ефикасност елуирања.
Изолована геномска ДНК ниског приноса
Следећи могући узроци су следећи:
1. Неправилно чување узорака или предуго складиштење доводи до деградације геномске ДНК.
Препорука: Орални брисеви се по могућству узимају свеже, а сачувани брисеви не би требало да се користе за екстракцију геномске ДНК.
2. Ако је количина узорка ткива премала, садржај екстраховане геномске ДНК ће бити мањи.
Препорука: Пратите упутства за узимање узорака оралног бриса у упутству за употребу, обришите што је више пута могуће како би се довољно ћелија могло причврстити на орални брис за екстракцију геномске ДНК.
3. Фореген протеаза је непрописно очувана, што доводи до смањења њене активности или инактивације.
Препорука: Потврдите услове складиштења Форегене протеазе или је замените новом Форегене протеазом за ензимску реакцију.
4. Проблеми са елуентом.
Препорука: Користите пуфер ЕБ за елуирање;ако користите ддХ2О или други елуенти, потврдите да је пХ елуата између 7,0-8,5.
5. Елуат није правилно додан кап по кап.
Препорука: Додајте капи елуента у средину силиконске мембране и оставите на собној температури 5 минута да повећате ефикасност елуирања.
6. Течност за елуирање се акумулира премало.
Препорука: Користите елуент за елуирање геномске ДНК како се захтева у упутствима, најмање не мање од 15 μл.
Изолована је ниска чистоћа геномске ДНК
Ниска чистоћа геномске ДНК може довести до неуспеха или незадовољавајућих резултата низводних експеримената, као што су: ензими се не могу отворити, ПЦР не може добити фрагмент гена од интереса, итд.
Могући узроци су следећи:
1. Хетеропротеинско загађење, РНК загађење.
Анализа: Колона за пречишћавање није испрана пуфером ПВ;колона за пречишћавање пуфера ПВ није испрана правилном центрифугалном брзином.
Препорука: Уверите се да нема талога у супернатанту пре додавања етанола;обавезно оперите колону за пречишћавање у складу са упутствима, а овај корак се не може изоставити.
2. Загађење јонима нечистоћа.
Анализа: Колона за пречишћавање пуфера ВБ је изостављена или је испрана само једном, што је резултирало заосталом јонском контаминацијом.
Препорука: Обавезно исперите пуфер ВБ 2 пута према упутствима да бисте уклонили заостале јоне што је више могуће.
3. Контаминација РНК ензима.
Анализа: Стране РНазе су додате пуферу;Операција испирања пуфера ПВ је била нетачна, што је резултирало остацима РНасе, што је утицало на низводне експерименталне операције РНК, као што је ин витро транскрипција.
Препорука: Комплети за изолацију нуклеинске киселине из серије Форегене могу уклонити РНК без додатног додавања РНазе, тако да комплет за изолацију ДНК букалног бриса/ФТА картице не мора да додаје РНКазу;обавезно пратите упутства за колону за пречишћавање пуфера ПВ и овај корак се не може изоставити.
4. Остатак етанола.
Анализа: Пуфер ВБ није извршио центрифугирање празне епрувете након прања колоне за пречишћавање.
Препорука: Извршите исправну операцију центрифугирања празне епрувете према упутствима.
5. Загађење другим нечистоћама.
Анализа: Сачувани узорци или специјални узорци нису претходно третирани.
Препорука: Темељно претходно обрадите узорак према упутствима.
