Есцхерицхиа цоли О157:Х7 Комплет за детекцију нуклеинске киселине (ПЦР метода флуоресцентне сонде)
Опис комплета:
Кат.бр.ФП102
Користи се за брзо откривање и скрининг Е. цоли О157:Х7 у узорцима хране, хране, воде и животне средине.
Описи
Користи се за брзо откривање и скрининг Е. цоли О157:Х7 у узорцима хране, хране, воде и животне средине.
[Принцип тестирања]Према принципу флуоресцентне ПЦР технологије, специфични прајмери и Такман сонде су дизајнирани за специфични ген Есцхерицхиа цоли О157: Х7, и детектовани флуоресцентним ПЦР инструментом, како би се реализовала детекција Есцхерицхиа цоли О157: Х7 Квалитативна детекција ДНК.
Садржај комплета
Напомена: РОКС канална сонда није укључена.
| Cопоненти | Спецификација | Qјединство |
| Пуфер А | Тубе | 1 |
| Пуфер Б | Тубе | 1 |
| Позитивна контрола | Тубе | 1 |
| Негативна контрола | Тубе | 1 |
Очекивана употреба
Користи се за брзо откривање и скрининг Е. цоли О157:Х7 у узорцима хране, хране, воде и животне средине.
Услови складиштења и рок трајања
Чувајте на -20 ℃ у мраку и избегавајте поновно замрзавање и одмрзавање.
Рок важења је 12месеци, а датум производње је приказан на спољној амбалажи.
Инструменти и потрошни материјал
Флуоресцентни квантитативни ПЦР инструмент, пиштољ за пипете и одговарајући врхови, вортекс шејкер, мини центрифуга.
Употреба
1. Обрада узорка
1.1 Тип узорка: Овај комплет је погодан за узорке хране, хране, воде и других узорака за које се сумња да су контаминирани Есцхерицхиа цоли О157:Х7.За дубоко обрађене месне производе, пића и друге супстанце које садрже пигменте, потребно их је испрати како би се избегло утицај на прикупљање флуоресцентног сигнала.
1.2 Обрада узорака: Погледајте „ГБ 4789.10-2016 Национални стандардни стандард за микробиолошко испитивање хране Есцхерицхиа цоли О157: Х7 Тест“ за припрему узорка, културу обогаћивања и изолацију Есцхерицхиа цоли О157: Х7.
- Nекстракција уклеинске киселине
Узмите 20 мЛ раствора за обогаћивање у епрувету за центрифугирање од 1,5 мЛ, додајте 200 μЛ микробног лизата (потребан је додатни комплет), мешајте 30 секунди, кратко центрифугирајте и оставите на страну.
Напомене: Екстракција нуклеинске киселине из лизата треба да се заврши у року од 10 минута и не може се чувати дуже време.
3. Амплификација нуклеинске киселине
3.1 Укључите флуоресцентни квантитативни ПЦР инструмент за употребу.
Пуфер А и пуфер Б из комплета, добро их истопите и кратко центрифугирајте.Додајте 18 μЛ пуфера А и 2 μЛ пуфера Б у сваку ПЦР реакциону епрувету.Затим додајте по 5 мЛ сваке негативне контроле, екстраховане нуклеинске киселине и позитивне контроле у епрувете за ПЦР реакцију, затворите епрувете и кратко центрифугирајте.
3.3 Пренесите ПЦР реакциону епрувету у флуоресцентну ПЦР машину и користите следеће процедуре за извођење експеримената са појачавањем: изаберите 25 мЛ за реакциони систем, прикупите флуоресцентне сигнале на 60°Ц за сваки циклус и изаберите ФАМ за канал за детекцију.
| Корак | Програм | Број циклуса |
| 1 | 37℃ 5мин | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3мин | 1 |
| 3 | 95°Ц 15с | 4 0 |
| 60℃ 30с (сакупља флуоресценцију) |
Водичи за анализу проблема
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
РНК се не може екстраховати или је принос нуклеинске киселине низак
Обично постоји много фактора који утичу на ефикасност опоравка, као што су: садржај узорка РНК, начин рада, запремина елуирања, итд.
Анализа уобичајених узрока:
1. Ледено купатило или центрифугирање на ниској температури (4 ° Ц) током рада.
Препорука: Рад на собној температури (15-25 ° Ц), никада ледено купатило и нискотемпературна центрифуга.
2. Неправилно складиштење узорака или складиштење узорака предуго.
Препорука: Чувајте узорке на -80 °Ц или замрзните у течном азоту и избегавајте поновну употребу замрзавања-одмрзавања;покушајте да користите свеже сакупљене узорке за екстракцију РНК.
3.Недовољна лиза узорка
Препорука: Уверите се да су узорак и радни раствор (линеарни акриламид) темељно помешани и инкубирани 10 минута на собној температури (15-25°Ц)
4.Елуент је додат погрешно
Препорука: Уверите се да је ддХ2О без РНазе додат у средину мембране колоне за пречишћавање
5. Неодговарајућа запремина анхидрованог етанола у пуферу виРВ2
Предлог: Молимо вас да пратите упутства, додајте тачну количину анхидрованог етанола у пуфер виРВ2 и добро их промешајте пре употребе комплета.
6. Неправилна употреба узорка.
Препорука: 200 µл узорка на 500 µл Буффер виРЛ.Превелика запремина узорка ће довести до смањене стопе екстракције РНК.
7. Неправилна запремина елуирања или непотпуно елуирање.
Предлог: Запремина елуента колоне за пречишћавање је 30-50μл;ако ефекат елуирања није задовољавајући, препоручује се додавање претходно загрејаног ддХ без РНазе2О и продужите време стављања на собну температуру, као што је 5-10 мин
8. Колона за пречишћавање има остатак етанола након испирања у пуферу виРВ2.
Предлог: Ако етанол и даље остаје након испирања у пуферу виРВ2 и центрифугирања у празној епрувети током 2 минута, колона за пречишћавање се може оставити на собној температури 5 минута након центрифугирања у празној епрувети да би се у потпуности уклонио преостали етанол.
Деградација пречишћених молекула РНК
Квалитет пречишћене РНК је повезан са факторима као што су складиштење узорака, контаминација РНК-азом и рад.
Анализа уобичајених узрока:
1. Прикупљени узорци нису сачувани на време.
Препорука: Ако се узорак не употреби на време након сакупљања, одмах га чувајте на -80 ℃ или течном азоту.За екстракцију РНК молекула, покушајте да користите свеже сакупљене узорке кад год је то могуће.
2. Прикупљени узорци су више пута замрзнути и одмрзнути.
Препорука: Избегавајте поновно замрзавање и одмрзавање (не више од једном) током сакупљања и складиштења узорака, иначе ће се смањити принос нуклеинске киселине.
3. РНасе је уведена у операциону салу или нису стављене рукавице за једнократну употребу, маске итд.
Предлог: Експеримент екстракције молекула РНК најбоље је извести у посебној операционој сали РНК, а експериментални сто се очисти пре експеримента.Носите рукавице и маске за једнократну употребу током експеримента да бисте избегли деградацију РНК узроковану увођењем РНКазе.
4. Реагенс је контаминиран РНазом током употребе.
Предлог: Замените новим комплетом за изолацију вирусне РНК за повезане експерименте.
5. Контаминација РНасе епрувета за центрифугирање, врхова пипета, итд. Предлог: Уверите се да су све епрувете за центрифугирање, врхови пипете и пипете без РНазе.
Пречишћени молекули РНК утицали су на низводне експерименте
Молекули РНК пречишћени колоном за пречишћавање ће утицати на низводне експерименте ако има превише јона соли или протеина, као што су: реверзна транскрипција, Нортхерн Блот, итд.
1. У елуираним молекулима РНК постоје преостали јони соли.
Препорука: Уверите се да је тачна запремина анхидрованог етанола додата у пуфер виРВ2, и оперите колону за пречишћавање два пута у складу са тачном брзином центрифугирања у упутству за употребу; Ако још има јона соли, можете додати пуфер виРВ2 у колону за пречишћавање и оставити је на собној температури 5 минута.Затим извршите центрифугирање да бисте у највећој мери уклонили контаминацију јонима соли
2. У елуираним молекулима РНК има преосталог етанола
Предлог: када потврдите да су колоне за пречишћавање испране помоћу Буффер виРВ2, извршите центрифугирање у празној епрувети према брзини центрифуге у упутству за употребу.Ако још увек има преосталог етанола, може се оставити 5 минута на собној температури након центрифугирања у празној епрувети да би се у највећој мери уклонио преостали етанол.
Упутства за употребу:
Приручник за употребу комплета за изолацију вирусне РНК
