Водич за анализу проблема

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Низак принос или без ДНК

Обично постоји много фактора који утичу на принос геномске ДНК, укључујући извор узорка, старост узорка, услове складиштења узорка и операцију.

Геномска ДНК није могла да се добије током екстракције

1. Узорци ткива се неправилно чувају или складиште предуго, што доводи до деградације геномске ДНК.

Препорука: Чувати узорке ткива у течном азоту или -20°Ц;покушајте да користите новосакупљене узорке за екстракцију геномске ДНК.

2. Премала количина узорка може довести до тога да се одговарајућа геномска ДНК не екстрахује.

Препорука: За узорке ткива који су чувани дуже време или имају озбиљну деградацију геномске ДНК, количина узорака ткива може се на одговарајући начин повећати како би се издвојила знатна геномска ДНК.Количина узорка се може одредити према потребама ДНК, али свеж узорак не би требало да прелази 100 мг, а суви узорак не би требало да прелази 30 мг.

3. Узорак се не меље течним азотом или ставља предуго након течног азота.

Предлог: Током екстракције ДНК, узорак треба у потпуности да се самље течним азотом да би се разбио ћелијски зид;након млевења, пренесите узорак праха у ПЛ1 претходно загрејан на 65°Ц што је пре могуће (када се млевени прах отопи, геномска ДНК ће почети брзо да се разграђује) .

4. Неправилно складиштење Фореген протеазе доводи до смањене или инактивиране активности.

Препорука: Потврдите услове складиштења Форегене протеазе или је замените новом Форегене протеазом за ензимску хидролизу.

5. Комплет је непрописно ускладиштен или се складишти предуго, што доводи до квара неких компоненти у комплету.

Препорука: Купите нови комплет за екстракцију геномске ДНК биљке за повезане операције.

6. Неправилна употреба комплета.

Предлог: Купите комплет за изолацију ДНК биљака намењен узорцима за екстракцију и пречишћавање биљне геномске ДНК.

7. Буффер ВБ без додавања анхидроус етанол.

Препорука: Обавезно додајте тачну количину апсолутног етанола у пуфер ВБ.

8. Елуент није правилно капао на мембрану од силицијум диоксида.

Предлог: Додајте претходно загрејани елуент на 65℃кап по кап на средину мембране силика гела и оставити на собној температури 5 минута да би се повећала ефикасност елуирања.

Екстракција за добијање геномске ДНК ниског приноса

1. Узорак је непрописно ускладиштен или складиштен предуго, што доводи до деградације геномске ДНК.

Препорука: Чувати узорке ткива на -20℃;покушајте да користите новосакупљене узорке ткива за екстракцију геномске ДНК.

2. Ако је количина узорака ткива премала, екстрахована геномска ДНК ће бити мања.

Препорука: Неки биљни узорци су богати водом, као што су водене биљке као што су алге, итд., доза се може на одговарајући начин повећати или се вода може мало дехидрирати пре операције.

3. Узорци нису добро млевени течним азотом или су остављени на собној температури предуго након млевења.

Предлог: млевење течног азота мора бити довољно, а зид ћелије узорка треба да буде разбијен што је више могуће;одмах након млевења, узорак праха треба пренети на 65℃претходно загрејани пуфер ПЛ1 за следећи корак.

4. Не користите одговарајући комплет.

Препорука: Користите наменски комплет за изолацију ДНК биљака за екстракцију и пречишћавање биљне геномске ДНК.

5. Неправилно складиштење Фореген протеазе доводи до смањене или инактивиране активности.

Препорука: Потврдите услове складиштења Форегене протеазе или је замените новом Форегене протеазом за ензимску хидролизу.

6. Проблем елуента

Препорука: Користите пуфер ЕБ за елуирање;ако користите ддХ₂О или других елуенса, уверите се да је пХ елуента између 7,0-8,5.

7. Елуент није правилно укапан

Предлог: Додајте кап за елуирање у средину силицијумске мембране и оставите је на собној температури 5 минута да бисте повећали ефикасност елуирања.

8. Запремина елуента је премала

Предлог: Користите елуент за елуирање геномске ДНК према упутствима, најмање не мање од 100μл.

Екстрахована геномска ДНК ниске чистоће

Ниска чистоћа геномске ДНК ће довести до неуспеха или лошег ефекта низводних експеримената, као што су: ензим се не може пресећи, а циљни генски фрагмент се не може добити ПЦР-ом.

1. Разна контаминација протеинима, контаминација РНК.

Анализа: Пуфер ПВ није коришћен за прање колоне;Пуфер ПВ није коришћен за прање колоне при исправној брзини центрифугирања.

Предлог: покушајте да обезбедите да нема таложења у супернатанту када се супернатант пропушта кроз колону;обавезно оперите колону за пречишћавање пуфером ПВ према упутствима и овај корак се не може изоставити.

2. Загађење јонима нечистоћа.

Анализа: Колона за испирање пуфера ВБ је изостављена или је испрана само једном, што је резултирало заосталом јонском контаминацијом.

Препорука: Обавезно два пута исперите пуфером ВБ у складу са упутствима да бисте уклонили заостале јоне што је више могуће.

3. Контаминација РНасе.

Анализа: У пуфер се додаје егзогена РНКаза;нетачна операција испирања у пуферу ПВ ће резултирати резидуалном РНазом и утицати на низводне експерименталне РНК операције, као што је ин витро транскрипција.

Сугестија: Комплети за екстракцију нуклеинске киселине серије Форегене могу уклонити РНК без додатне РНКазе, а свим реагенсима у комплету за изолацију ДНК биљака није потребна РНАза;обавезно оперите колону за пречишћавање пуфером ПВ према упутствима и овај корак се не може изоставити.

4. Остаци етанола.

Анализа: Након прања колоне за пречишћавање пуфером ВБ, није вршено центрифугирање празне епрувете.

Препорука: Пратите упутства за правилно центрифугирање празних епрувета.

Упутства за употребу:

Приручник за употребу комплета за изолацију ДНК биљака