ПЦР у реалном времену Еасиᵀᴹ-Такман
Описи комплета
2Кс Реал ПЦР ЕасиTMМик-Такман обезбеђује ПЦР у реалном времену ЕасиTM-Такман комплет је нови премикс систем који користи специфичне флуоресцентне сонде за реакције ПЦР амплификације у реалном времену, што може значајно побољшати специфичност производа и осетљивост реакције.РОКС је обезбеђен као боја за унутрашњу контролу.
2Кс Реал ПЦР ЕасиTMМик-Такман садржи Форегене-ову јединствену Так ДНК полимеразу са врућим стартом.У поређењу са обичним Так ензимима, он има предности високе ефикасности амплификације, јаке специфичне способности амплификације и ниске стопе неусклађености.Може смањити неспецифично појачање и побољшати тачност ПЦР-а.
Спецификације
ПЦР у реалном времену једноставноTM-Такман | ||||
Састав комплета (20μл систем) | КП-01021 | КП-01022 | КП-01023 | КП-01024 |
200T | 500Т | 1000Т | 2000T | |
2×Прави ПЦРЛакоTMМик-Такман | 1 мл ×2 | 1.7 мл ×3 | 1.7 мл ×6 | 1.7 мл ×12 |
20×РОКС референтна боја | 200 μл | 0.5ml | 1 мл | 1 мл × 2 |
ддХ без ДНазе2O | 1,7 мл | 1.7 мл ×2 | 10 мл | 20 мл |
Iнструцтион | 1 | 1 | 1 | 1 |
Карактеристике и предности
■ Једноставно—2Кс ПЦР мешавина за смањење експерименталне грешке и време рада
■ Специфичан—оптимизовани пуфер и Так ензим са врућим стартом могу спречити неспецифично појачање и формирање димера прајмера
■ Висока осетљивост—може открити мале копије шаблона
■ Добра свестраност—компатибилна са већином квантитативних ПЦР инструмената у реалном времену
Апликација комплета
кПЦР анализа
Процес рада
Графика
Складиштење и рок трајања
Овај комплет треба чувати даље од светлости и треба га чувати на -20 ℃.Ако се често користи, може се чувати и на 4℃ у кратком временском периоду (10 дана).
Нема појачања сигнала
1.Так ДНК полимераза у комплету губи своју активност због неправилног складиштења или истека комплета.
Препорука: Потврдите услове складиштења комплета;поново додајте одговарајућу количину Так ДНК полимеразе у ПЦР систем или купите нови комплет за ПЦР у реалном времену за повезане експерименте.
2. Постоји много инхибитора Так ДНК полимеразе у ДНК шаблону.
Предлог: Пречистите шаблон или смањите количину коришћеног шаблона.
3. Концентрација Мг2+ није погодна.
Препорука: Концентрација Мг2+ у 2× Реал ПЦР мешавини коју пружамо је 3,5 мМ.Међутим, за неке посебне прајмере и шаблоне, концентрација Мг2+ може бити већа.Због тога можете директно додати МгЦл2 да бисте оптимизовали концентрацију Мг2+.Препоручује се повећање Мг2+ за 0,5мМ сваки пут ради оптимизације.
4. Услови ПЦР амплификације нису прикладни, а секвенца прајмера или концентрација је неодговарајућа.
Предлог: потврдите исправност секвенце прајмера и прајмер није деградиран;ако сигнал појачања није добар, покушајте да смањите температуру жарења и на одговарајући начин подесите концентрацију прајмера.
5. Количина шаблона је премала или превелика.
Препорука: Извршите разблаживање градијентом линеаризације шаблона и изаберите концентрацију шаблона са најбољим ПЦР ефектом за ПЦР експеримент у реалном времену.
НТЦ има превисоку вредност флуоресценције
1. Контаминација реагенсом током рада.
Препорука: Замените новим реагенсима за ПЦР експерименте у реалном времену.
2. До контаминације је дошло током припреме ПЦР реакционог система.
Препорука: Предузмите неопходне заштитне мере током рада, као што су: ношење рукавица од латекса, употреба врха пипете са филтером итд.
3. Прајмери су деградирани, а деградација прајмера ће изазвати неспецифично појачање.
Предлог: Користите СДС-ПАГЕ електрофорезу да откријете да ли су прајмери деградирани и замените их новим прајмерима за ПЦР експерименте у реалном времену.
Димер прајмера или неспецифична амплификација
1. Концентрација Мг2+ није погодна.
Препорука: Концентрација Мг2+ у 2× Реал ПЦР ЕасиТМ мешавини коју пружамо је 3,5 мМ.Међутим, за неке посебне прајмере и шаблоне, концентрација Мг2+ може бити већа.Због тога можете директно додати МгЦл2 да бисте оптимизовали концентрацију Мг2+.Препоручује се повећање Мг2+ за 0,5мМ сваки пут ради оптимизације.
2. Температура ПЦР жарења је прениска.
Предлог: Сваки пут повећајте температуру ПЦР жарења за 1℃ или 2℃.
3. ПЦР производ је предугачак.
Препорука: Дужина ПЦР производа у реалном времену треба да буде између 100-150бп, не више од 500бп.
4. Прајмери су деградирани, а деградација прајмера ће довести до појаве специфичне амплификације.
Предлог: Користите СДС-ПАГЕ електрофорезу да откријете да ли су прајмери деградирани и замените их новим прајмерима за ПЦР експерименте у реалном времену.
5. ПЦР систем је неисправан или је систем премали.
Предлог: ПЦР реакциони систем је премали што ће довести до смањења тачности детекције.Најбоље је користити реакциони систем који препоручује квантитативни ПЦР инструмент за поновно покретање ПЦР експеримента у реалном времену.
Слаба поновљивост квантитативних вредности
1. Инструмент је неисправан.
Предлог: Може постојати грешке између сваког ПЦР отвора на инструменту, што доводи до лоше поновљивости током управљања температуром или детекције.Проверите према упутствима одговарајућег инструмента.
2. Чистоћа узорка није добра.
Препорука: Нечисти узорци ће довести до лоше поновљивости експеримента, што укључује чистоћу шаблона и прајмера.Најбоље је поново пречистити шаблон, а прајмери се најбоље пречишћавају помоћу СДС-ПАГЕ.
3. Време припреме и складиштења ПЦР система је предуго.
Предлог: Користите ПЦР систем у реалном времену за ПЦР експеримент одмах након припреме и не остављајте га предуго по страни.
4. Услови ПЦР амплификације нису прикладни, а секвенца прајмера или концентрација је неодговарајућа.
Предлог: потврдите исправност секвенце прајмера и прајмер није деградиран;ако сигнал појачања није добар, покушајте да смањите температуру жарења и на одговарајући начин подесите концентрацију прајмера.
5. ПЦР систем је неисправан или је систем премали.
Предлог: ПЦР реакциони систем је премали што ће довести до смањења тачности детекције.Најбоље је користити реакциони систем који препоручује квантитативни ПЦР инструмент за поновно покретање ПЦР експеримента у реалном времену.