Кит (96 бунара) КуицкЕаси Целл Дирецт РТ-кПЦР – СИБР Греен И
Описи
Тхе(96 бунара) КуицкЕасиTM Целл Дирецт РТ-кПЦР комплет–СИБР Греен Ипружајединствени систем пуфера за лизуto брзо ослобађају РНКиз култивисане ћелијеузорци за РТ-кПЦР реакције, елиминишући дуготрајне и напорнеПроцес пречишћавања РНК и траје само 7 минута да се добије потребан РНК шаблон.Тхе5× Дирецт РТ Мики2× Дирецт кПЦР Мик-СИБРобезбеђен у кутији може брзо иефективно добити квантитативне податке у реалном временуПЦР резултати.
5× Дирецт РТ Мик и 2× Дирецт кПЦР Мик-СИБР имају јаку толеранцију на инхибиторе и могу користити лизат узорка који се тестира као шаблон за ефикасну реверзну транскрипцију и специфично појачање.Реагенс садржи Форегене јединствену реверзну транскриптазу са високим афинитетом за РНК, као и Хот Д-Так ДНК полимеразу, дНТП, МгЦл2 , реакциони пуфер, ПЦР оптимизатор и стабилизатор, и може се користити у комбинацији са пуфером за лизу за брзо, лако и прецизно детекцију узорка, а има карактеристике високе осетљивости, јаке специфичности и добре стабилности.
Комплет је намењен микросистемској лизи култивисаних ћелија са 96 јажица и има добру униформност и конзистенцију;компоненте комплета обезбеђују 96 реакција лизе, 96 реакција реверзне транскрипције и 96×2 кПЦР реакција, које могу задовољити плочу ћелија са 96 бунара за једнократну употребу, избегавајући загађење изазвано поновљеним отварањем, замрзавањем и одмрзавање реагенса и деградацијом перформанси реагенса.
Компоненте комплета
| Састав комплета ( 50 μЛ систем за лизу/20 μЛRT реакциони систем /20μЛ кПЦР реакциони систем) | ДРТ-03011 | Напомена | |
| 96Т | |||
| ПартI | БуфферCL | 5 мЛ | ЋелијаЛисис |
| ФорегенеПротеасе Плус ИИ | 100 μL | ||
| БуфферST | 500 μL | ||
| Парт II | ДНКГумица за брисање | 100 μL | |
| 5× Дирецт РТ Мик | 400 μL | RT | |
| 2× Директна кПЦР мешавина-СИБР | 1 мL × 2 | кПЦР | |
| 50× РОКС референтна боја | 400µЛ | ||
| РНасе- бесплатноддХ2 O | 1.7мЛ |
| |
| Mгодишњи | 1 комад | 1 порција | |
*: Реагенс за лизу ДНК Ерасер је укључен у Део ИИ комплета;Компоненте за лизу ћелија, РТ и кПЦР могу се купити засебно.
Карактеристике и предности
■Једноставно и ефикасно: са Целл Дирецт РТ технологијом, узорци РНК се могу добити за само 7 минута.
■ Потреба за узорком је мала, може се тестирати само 10 ћелија.
■ Висока пропусност: може брзо да открије РНК у ћелијама култивисаним у плочама са 384, 96, 24, 12, 6 јажица.
■ ДНК Ерасер може брзо уклонити ослобођене геноме, значајно смањити утицај на накнадне експерименталне резултате.
■ Оптимизовани РТ и кПЦР систем чини двостепену РТ-ПЦР реверзну транскрипцију ефикаснијом, а ПЦР специфичнијим и отпорнијим на инхибиторе РТ-кПЦР реакције.
Апликација комплета
Обим примене: култивисане ћелије.
- РНК ослобођена лизом узорка: применљиво само на РТ-кПЦР шаблон овог комплета.
- Комплет се може користити у следеће сврхе: анализа експресије гена, верификација ефекта утишавања гена посредованог сиРНА, скрининг лекова итд.
Складиштење и рок трајања
Део И овог комплета треба чувати на 4℃;Део ИИ треба чувати на -20℃.
Форегене Протеасе Плус ИИ треба чувати на 4℃, не замрзавајте на -20 ℃.
Реагенс 2×Директни кПЦР Мик-Такман треба чувати на -20℃у мраку;ако се често користи, може се чувати и на 4℃ за краткотрајно складиштење (искористите у року од 10 дана).
Принципи дизајна ПЦР прајмера у реалном времену
Форвард Пример и Реверсе Пример
За ПЦР у реалном времену, дизајн прајмера је веома важан.Прајмери се односе на специфичност и ефикасност ПЦР амплификације и могу се дизајнирати на основу следећих принципа:
- Дужина прајмера: 18-30бп.
- ГЦ садржај: 40-60%.
- Тм вредност: Софтвер за дизајн прајмера, као што је Пример 5, може дати Тм вредност прајмера.Вредности Тм узводних и низводних прајмера треба да буду што је могуће ближе.Може се користити и формула за израчунавање Тм: Тм = 4 °Ц (Г + Ц) + 2 °Ц (А + Т).Приликом обављања ПЦР-а, температура испод Тм вредности прајмера од 5 °Ц се генерално бира као температура жарења (одговарајуће повећање температуре жарења може повећати специфичност ПЦР реакције).
- Прајмери и ПЦР производи:
- Дужина производа ПЦР амплификације прајмера је пожељно 100-150бп.
- Дизајн прајмера у секундарној структурној области шаблона треба избегавати што је више могуће.
- Избегавајте формирање 2 или више комплементарних база између 3′ крајева узводног и низводног прајмера.
- Прајмер 3′ терминална база не може бити присутна са 3 додатна узастопна Г или Ц.
- Сами прајмери не могу имати комплементарне структуре, иначе ће се формирати структура укоснице која утиче на ПЦР амплификацију.
- АТЦГ треба да буде распоређен што је могуће равномерније у секвенци прајмера, а 3′ терминалну базу треба избегавати као Т.
слепо црево1: Целл ДирецтРТ-кПЦР Кит цомпонент пакет додатака
1. Решење за лизу ћелија
| Раствор за лизу ћелија | |||
| Компоненте комплета (систем за лизу са 24 бунара / бунар) | ДРТ-01011-А1 | ДРТ-01011-А2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ПартИ | Буффер ЦЛ | 20 мл | 100 мл |
| Фореген Протеасе Плус ИИ | 400 μл | 1 мл × 2 | |
| Буффер СТ | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ПартИИ | ДНК Ерасер | 400 μл | 1 мл × 2 |
| РТ Мик | |
| Компоненте комплета (20 μл реакциони систем) | ДРТ-01011-Б1 |
| 200 Т | |
| 5× Дирецт РТ Мик | 800 μл |
| ддХ без РНазе2O | 1,7 мл × 2 |
| кПЦР Мик | ||
| Компоненте комплета (20 μл реакциони систем) | ДРТ-01021-Ц1 | ДРТ-01021-Ц2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× РОКС референтна боја | 40 μл | 200 μл |
| ддХ без РНазе2O | 1,7 мл | 10 мл |
Упутства за употребу:
