Целл Дирецт РТ кПЦР комплет—Такман директна ћелијска лиза ћелија спремна за кРТ-ПЦР комплете у једном кораку сонда
Описи
Овај производ користи јединствени пуфер систем за лизу за брзо ослобађање РНК из узорака култивисаних ћелија за РТ-кПЦР реакције, елиминишући дуготрајан и напоран процес пречишћавања РНК и само 7 минута за добијање потребног РНК шаблона, уз 5× директну РТ мешавину, 2× директну кПЦР мешавину, 2× директну кПЦР мешавину-Такман који се добија брзо и ефикасно помоћу комплета.
5× Дирецт РТ Мик и 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман имају јаку толеранцију на инхибиторе и могу да изврше ефикасан преокрет и специфично појачање користећи лизат узорка који се мери као шаблон.Реагенс садржи Форегене реверзну транскриптазу, врућу Д-Так ДНК полимеразу, дНТП, МгЦл2, Реацтион Буффер, ПЦР Оптимизер и Стабилизер, који се може користити са пуфером за лизу за брзо и лако откривање узорака, а има карактеристике високе осетљивости, специфичности и стабилности.
Спецификације
200×20μл Ркнс, 1000×20μл Ркнс
Компоненте комплета
| КуицкЕасиTMЦелл Дирецт РТ-кПЦР Кит-Такман | ||||
| Компоненте комплета 20μл кПЦР реакциони систем | ДРТ-01021 | ДРТ-01022 | Белешка | |
| 200 Т | 1000 Т | |||
|
Парт I | Буффер ЦЛ | 4 мл | 20 мл | Целл Лисис |
| Фореген Протеасе Плус ИИ | 80 μл | 400 μл | ||
| Буффер СТ | 400 μл | 1 мл × 2 | ||
|
Парт II | ДНК Ерасер | 80 μл | 400 μл | |
| 5×Дирецт РТ Мик * | 160 μл | 800 μл | RT | |
| 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман * | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 | кПЦР | |
| 20×РОКС референтна боја | 40 μл | 200 μл | ||
| ддХ без РНазе2O | 1,7 мл | 10 мл | ||
| Упутства за употребу | 1 комад | 1 комад | ||
*:Лиза ћелија, 5×Дирецт РТ Мик, 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман се може купити засебно
Карактеристике и предности
■Једноставно и ефикасно: са Целл Дирецт РТ технологијом, узорци РНК се могу добити за само 7 минута.
■ Потреба за узорком је мала, може се тестирати само 10 ћелија.
■ Висока пропусност: може брзо да открије РНК у ћелијама култивисаним у плочама са 384, 96, 24, 12, 6 јажица.
■ ДНК Ерасер може брзо уклонити ослобођене геноме, значајно смањити утицај на накнадне експерименталне резултате.
■ Оптимизовани РТ и кПЦР систем чини двостепену РТ-ПЦР реверзну транскрипцију ефикаснијом, а ПЦР специфичнијим и отпорнијим на инхибиторе РТ-кПЦР реакције.
Апликација комплета
Обим примене: култивисане ћелије.
- РНК ослобођена лизом узорка: применљиво само на РТ-кПЦР шаблон овог комплета.
- Комплет се може користити у следеће сврхе: анализа експресије гена, верификација ефекта утишавања гена посредованог сиРНА, скрининг лекова итд.
Складиштење и рок трајања
Део И овог комплета треба чувати на 4℃;Део ИИ треба чувати на -20℃.
Форегене Протеасе Плус ИИ треба чувати на 4℃, не замрзавајте на -20 ℃.
Реагенс 2×Директни кПЦР Мик-Такман треба чувати на -20℃у мраку;ако се често користи, може се чувати и на 4℃ за краткотрајно складиштење (искористите у року од 10 дана).
Принципи дизајна ПЦР прајмера у реалном времену
Форвард Пример и Реверсе Пример
За ПЦР у реалном времену, дизајн прајмера је веома важан.Прајмери се односе на специфичност и ефикасност ПЦР амплификације и могу се дизајнирати на основу следећих принципа:
- Дужина прајмера: 18-30бп.
- ГЦ садржај: 40-60%.
- Тм вредност: Софтвер за дизајн прајмера, као што је Пример 5, може дати Тм вредност прајмера.Вредности Тм узводних и низводних прајмера треба да буду што је могуће ближе.Може се користити и формула за израчунавање Тм: Тм = 4 °Ц (Г + Ц) + 2 °Ц (А + Т).Приликом обављања ПЦР-а, температура испод Тм вредности прајмера од 5 °Ц се генерално бира као температура жарења (одговарајуће повећање температуре жарења може повећати специфичност ПЦР реакције).
- Прајмери и ПЦР производи:
- Дужина производа ПЦР амплификације прајмера је пожељно 100-150бп.
- Дизајн прајмера у секундарној структурној области шаблона треба избегавати што је више могуће.
- Избегавајте формирање 2 или више комплементарних база између 3′ крајева узводног и низводног прајмера.
- Прајмер 3′ терминална база не може бити присутна са 3 додатна узастопна Г или Ц.
- Сами прајмери не могу имати комплементарне структуре, иначе ће се формирати структура укоснице која утиче на ПЦР амплификацију.
- АТЦГ треба да буде распоређен што је могуће равномерније у секвенци прајмера, а 3′ терминалну базу треба избегавати као Т.
слепо црево1: Целл ДирецтРТ-кПЦР Кит цомпонент пакет додатака
1. Решење за лизу ћелија
| Раствор за лизу ћелија | |||
| Компоненте комплета (систем за лизу са 24 бунара / бунар) | ДРТ-01011-А1 | ДРТ-01011-А2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ПартИ | Буффер ЦЛ | 20 мл | 100 мл |
| Фореген Протеасе Плус ИИ | 400 μл | 1 мл × 2 | |
| Буффер СТ | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ПартИИ | ДНК Ерасер | 400 μл | 1 мл × 2 |
| РТ Мик | |
| Компоненте комплета (20 μл реакциони систем) | ДРТ-01011-Б1 |
| 200 Т | |
| 5× Дирецт РТ Мик | 800 μл |
| ддХ без РНазе2O | 1,7 мл × 2 |
| кПЦР Мик | ||
| Компоненте комплета (20 μл реакциони систем) | ДРТ-01021-Ц1 | ДРТ-01021-Ц2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Дирецт кПЦР Мик-Такман | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× РОКС референтна боја | 40 μл | 200 μл |
| ддХ без РНазе2O | 1,7 мл | 10 мл |
Упутства за употребу:
