Принципи дизајна ПЦР прајмера у реалном времену

Форвард Пример и Реверсе Пример

За ПЦР у реалном времену, дизајн прајмера је веома важан.Прајмери ​​се односе на специфичност и ефикасност ПЦР амплификације и могу се дизајнирати на основу следећих принципа:

Дужина прајмера: 18-30бп.

ГЦ садржај: 40-60%.

Тм вредност: Софтвер за дизајн прајмера, као што је Пример 5, може дати Тм вредност прајмера.Вредности Тм узводних и низводних прајмера треба да буду што је могуће ближе.Може се користити и формула за израчунавање Тм: Тм = 4 °Ц (Г + Ц) + 2 °Ц (А + Т).Приликом обављања ПЦР-а, температура испод Тм вредности прајмера од 5 °Ц се генерално бира као температура жарења (одговарајуће повећање температуре жарења може повећати специфичност ПЦР реакције).

Прајмери ​​и ПЦР производи:

Дужина производа ПЦР амплификације прајмера је пожељно 100-150бп.

Дизајн прајмера у секундарној структурној области шаблона треба избегавати што је више могуће.

Избегавајте формирање 2 или више комплементарних база између 3′ крајева узводног и низводног прајмера.

Прајмер 3′ терминална база не може бити присутна са 3 додатна узастопна Г или Ц.

Сами прајмери ​​не могу имати комплементарне структуре, иначе ће се формирати структура укоснице која утиче на ПЦР амплификацију.

АТЦГ треба да буде распоређен што је могуће равномерније у секвенци прајмера, а 3′ терминалну базу треба избегавати као Т.

Додатак 1: Целл Дирецт РТ-кПЦР Кит компонентни пакет додатака

1.Раствор за лизу ћелија