Директни РТ-кПЦР комплет ИИИ
Опис комплета:
◮Директни РТ-кПЦР комплет, који користи Фореаси реверзну транскриптазу и Фореаси ХС Так ДНК полимеразу коју развија Форегене, са јединственим реакционим пуфером, чини овај комплет са јаком отпорношћу и компатибилношћу, и може директно тестирати реакцију користећи Форегене Лисис систем као шаблон.Овај комплет се може применити за комплет за откривање нуклеинске киселине ЦОВИД-19 и развој комплета за откривање нуклеинских киселина других патогених бактерија.
Опис
Директни РТ-кПЦР комплет обезбеђује одвојено упаковани РТ-кПЦР пуфер (са мешавином Фореаси ХС Так ДНК полимеразе) и високо ефикасанПредвидљива реверзна транскриптаза (ММЛВ),чинећи га погодним за креирање позадинских комплета и подешавање система, у оквиру једноставне провере.
Директни РТ-кПЦР комплет, који користи Фореаси реверзну транскриптазу и Фореаси ХС Так ДНК полимеразу коју развија Форегене, са јединственим реакционим пуфером, чини овај комплет са јаком отпорношћу и компатибилношћу, и може директно тестирати реакцију користећи Форегене Лисис систем као шаблон.Овај комплет се може применити за комплет за откривање нуклеинске киселине ЦОВИД-19 и развој комплета за откривање нуклеинских киселина других патогених бактерија.
Овај комплет може директно бити компонента ИВД производа, користећи се лако и брзо.Потребна је само лака верификација, без поновног развоја.
Спецификације
500Т, 50,000Т
Компоненте комплета
| Садржај комплета (20 μЛ реакциони систем) | ИМ-05111-03 | ИМ-05112-03 |
| 500 Т | 50.000 Т | |
| Фореаси Реверсе Транссцриптасе(200 У/μL) | 50 μЛ×1 | 1 мЛ×5 |
| 2× Директни кПЦРМик-Такман | 1 мЛ ×5 | 500 мЛ×1 |
| Упутство | 1 | 1 |
Оперативни кораци
О: Припремите шаблон и реагенс
1. Припремите припремљени РНК шаблон (препоручује се употреба комплета серије Форегене Тотал РНА Исолатион Кит за екстракцију и пречишћавање РНК шаблона) или производа за крекирање узорка (препоручује се употреба Форегене Лисис система), специфичне прајмере (10 μМ) и друге релевантне потрошне материјале, инструмент.
2. Ставите 2× директан РТ-кПЦР пуфер, ддХ2О без РНазе и 20× РОКС референтну боју (ако је потребно) у кутију са ледом, чинећи да се природно топе и лагано мешају.
Б: Припремите РТ-кПЦР систем
Добијте половину запремине реакционог пуфера реакционог система (на пример, ако је запремина система 20 μЛ, потребно је да добијете 10 μЛ 2× Дирецт РТ-кПЦР пуфера). Заодговарајућу количину ензима, ми то предлажемоМ-МЛВ: 10-30 У/20 μЛ реакциони систем,ТакДНК полимераза:1-2 У/20 μЛ реакциони системово је наш предлог, требало би да га тестирате и прилагодите), додајте РНК шаблон, специфичне прајмере и сонде и додајте ддХ без РНазе2О до 20 μЛ.Специфична припрема РТ-кПЦР реакционог система може се упутити на следећу табелу 1.
Табела 1: Припрема РТ-кПЦР система
| Саставни део | Волуме | Коначна концентрација |
| 2× Директни РТ-кПЦР пуфер | 10 μЛ | 1× |
| Предвидљива реверзна транскриптаза (ММЛВ) | 10-30 У | |
| Фореаси ХС Так ДНК полимераза | 1-2 У | |
| Предњи прајмер (10 μМ) | 0,8 μЛ | 50-900нМ |
| Реверзни прајмер (10 μМ) | 0,8 μЛ | 50-900нМ |
| Сонда (4 μМ) | 1 μЛ | 200нМ |
| Шаблон (РНА или лизат) | Кс μЛ | |
| 20× РОКС референтна боја | - | 1* |
| РНасе-ФрееддХ2O | (6,4-Кс) μЛ | |
| Укупан обим | 20 μЛ |
Напомена: Форвард Пример и Реверсе Пример су специфични прајмери циљног гена.Систем кПЦР-а се може прилагодити практичним експерименталним и ПЦР моделима.Препоручујемо 400 нМ за коначну концентрацију већине прајмера.Подесите запремину специфичних прајмера и сонди према припремљеној концентрацији и препорученој коначној концентрацији, молим.
1*: Изаберите одговарајућу коначну концентрацију РОКС референтне боје према различитим квантитативним ПЦР инструментима.Оптимална концентрација РОКС референтне боје за уобичајене квантитативне ПЦР инструменте је приказана у следећој табели:
| Квантитативни ПЦР инструменти | Коначна концентрација РОКС референтне боје |
| АБИ ПРИСМ 7000/7300/7700/7900ХТ/Степ Оне,итд. | 1× (на пример, додајте 1μл 20×РОКС референтне боје у 20 μЛ реакционом систему) |
| АБИ 7500, 7500 Фаст, Стратагене Мк3000П, Мк3005П и Мк4000, итд. | 0,5× (на пример, додајте 0,5 μл 20×РОКС референтне боје у 20 μЛ реакционог система) |
| Роцхе ПЦР инструмент, Био-Рад ПЦР инструмент, Еппендорф квантитативни ПЦР инструмент, итд. | Без РОКС референтне боје |
Складиштење и рок трајања
Комплет треба чувати на -20 ± 5 ℃.Одмах га треба чувати у термостатском фрижидеру -20℃.Рок важења је 2 године ако се чува у одговарајућем стању.
